Здійснено дослідження стосовно ідентифікації білків-партнерів активованої форми кінази рибосомного білка S6 у випадку використання методу двогібридної системи дріжжів і проаналізовано функціональне значення виявлених взаємодій у клітині. Розроблено високефективний метод трансформації клітин дріжжів кДНК бібліотекою. Проведено скринування кДНК бібліотеки клітин лінії HeLa за умов використання "байт"-конструкції активованої форми S6K1 T412D і відібрано позитивні клани, що містять кДНК потенційних білків-партнерів. Визначено нуклеотидні послідовності кДНК позитивних клонів та ідентифіковано їх за базою даних первинних послідовностей GenBank. Експресовано рекомбінантні S6K1-зв'язувальні білки у клітинах бактерій і очищено їх до гомогенності. Одержано моноклональні антитіла проти S6K1-зв'язувальних білків. Підтверджено існування виявлених взаємодій in vitro та in vivo методом імунопреципітації білково-білкових комплексів. З'ясовано функціональний зв'язок між S6K1 та S6K1-зв'язувальними білками.

  Завантажити