Досліджено структурні елементи впізнавання тирозинової тРНК синтетазою в реакції аміноацилювання з використанням методу сайт-направленого мутагенезу. Встановлено, що додатковий С-кінцевий домен тирозил-тРНК синтетази покращує каталітичну ефективність аміноацилювання тРНК-транскрипту за рахунок підсилювання зв'язування останнього з ферментом. Виявлено критичне значення амінокислотного залишку лізин-147 для активності тирозил-тРНК синтетази печінки бика в аміноацилюванні гомологічної тРНК.

  Скачати повний текст

Сформульовано і експериментально обгрунтовано концепцію регуляції мутагенезу під впливом екзогенних нуклеотидних послідовностей вірусного та клітинного походження. Первинним чинником індукованого мутагенезу в системі аденовірус - клітина є експресія ранніх регуляторних генів, відповідальних за стимуляцію реплікації та злоякісну трансформацію клітин. Вторинним чинником дестабілізації є перепрограмування клітинного геному (зміна активності та мутації клітинних генів, транспозиції мобільних генетичних елементів) під впливом експресії вірусних генів та інтеграції їх з хромосомною ДНК. Додатковим чинником мутагенезу, який підвищує ймовірність прояву мутацій, є відтягування репаративних ферментів клітини на взаємодію з молекулами генетичної матриці екзогенного походження. Вперше доведено, що аденовірус є комплексним мутагеном, мутагенна активність якого в непермісивних клітинах визначається взаємодією ранніх оперонів Е1А, Е1В та Е4. Показано корелятивну зміну мутагенної та трансформуючої активності вірусних та клітинних генів під впливом генетичних регуляторних елементів та пухлинного промотору ТРА. Часткова інактивація екзогенної ДНК призводить до зниження, а повна - до втрати мутагенності. Присутність молекул екзогенної ДНК або О6-бензилгуаніну, що інгібують репаративну активність АГТ, призводить до підвищення мутагенного ефекту нітрозогуанідину. Молекулярний аналіз мутацій, індукованих нітрозогуанідином за умов активної та пригніченої репарації, дозволив виявити деякі особливості роботи ферменту АГТ: однакову ефективність стосовно ниток ДНК, що транскрибуються і не транскрибуються, і підвищену точність виправлення пошкоджень на ГЦ-багатих ділянках, які мають більш високу температуру плавлення і довше зберігають двониткову структуру.

  Скачати повний текст

Дисертацію присвячено проблемам гетерозису і мінливості адаптивних ознак у Drosophila melanogaster в умовах впливу низькоінтенсивного лазерного випромінювання. Ефекти опромінення He-Ne лазером досліджено на організменному і субклітинному рівнях. Вивчено роль генотипічної й експозиційної компонент у детермінації кількісних ознак, пов'язаних із репродукцією та адаптацією. Встановлено, що опромінення на ранніх етапах онтогенезу приводить до змін вищевказаних ознак, а ступінь виразності ефекту гетерозису залежить від режиму впливу. Підтверджено взаємозв'язок між адаптивними ознаками і біоелектричними властивостями клітинних ядер.

  Скачати повний текст

  Скачати повний текст

  Скачати повний текст

Вивчено на модельних об'єктахBombyx mori L. та Drosophila melanogaster Meig. генетичні відмінності у мінливості ряду кількісних ознак під впливом мікрохвильового опромінення та температури, зміни біоелектричних властивостей клітинних ядер об'єктів. Проведене дослідження доповнило уявлення про роль заряду клітинних ядер у функціонуванні ядерного геному та вказало на можливість використання методу внутрішньоклітинного мікроелектрофорезу для оцінки впливу зовнішніх чинників на біологічні об'єкти.

  Скачати повний текст

Вивчено сумарну мутагенну активність стічних, поверхневих і підземних вод Львівщини. Виявлено, що шахтні води та стоки підприємств нафтопереробної та хімічної промисловості спричинюють мутагенний ефект. Зразки води з поверхневих водойм, до яких потрапляють стічні води, також здаті індукувати генні та хромосомні мутації, семантичну рекомбінацію. На підставі результатів дослідження мутагенності води за різних етапів водопідготовки Львівського водопроводу на станціях санітарної водопідготовки Львівської залізниці показано, що вода з артезіанських свердловин не зумовлює мутагенні ефекти. Введення хлору чи його сполук з метою дезінфекції призводить до індукції мутації різного типу. Показано, що добова експозиція з сорбетами природного (глауконітом, трепелом, активованим вугіллям, цеолітом) та синтетичного (іонообмінною смолою АВ-178 та КУ2-8) походження за певних випадків знижувала мутагенні ефекти хлороганічих забруднювачів питної води.

  Скачати повний текст

Досліджено соматичні клітини тварин з різних таксонів за мінливих екологічних умов. Виявлено, що у відповідь на середовищні, екологічні зміни у тварин різних таксонів (лабораторні лінії мишей, види полівок, різні породи великої рогатої худоби) дестабілізація каріотипу виникає за ознаками спостереження спонтанної нестабільності. Встановлено, що екологічні зміни тільки підсилюють їх вихідну нестабільність. Доведено наявність елементів упорядкованості в організації хромосомного апарату тварин і хромосом у гаплоїдні набори. Отримано дані про зв'язок між надхромосомною організацією генетичного матеріалу та каріотиповою стабільністю у тварин з різних таксонів. Досліджено зв'язки між взаємним розташуванням гомологічних хромосом у метафазних пластинках клітин кісткового мозку представників полівки-економки, звичайної полівки, периферичної крові тварин різних порід великої рогатої худоби та підвищеною частотою трапляння у них анеуплоїдних клітин.

  Скачати повний текст

Показано, що експресія генів 6-фосфофрукто-2-кіназа/фруктозо-2,6-бісфосфатаза (PFKFB)-4, PFKFB-3 та PFKFB-2 суттєво змінюється під впливом тривалої дії на організм метил-третбутилового ефіру у печінці, легенях і серці щурів і порушується альтернативний сплайсинг їх пре-мРНК. Виявлено новий альтернативний сплайс-варіант мРНК РРКРВ4, що індукується під впливом метил-третбутилового ефіру. Встановлено, що зміни в експресії генів PFKFB-3 та PFKFB-4 під впливом метил-третбутилового ефіру є тканино-специфічними та дозо-залежними. У печінці та легенях також виявлено зміни в альтернативному сплайсингу пре-мРНК PFKFB-2, в результаті чого посилюється експресія варіантів PFKFB без каталітичних доменів 6-фосфофрукто-2-кінази. Встановлено, що під впливом тривалої дії різних доз метил-третбутилового ефіру значно порушується експресія мРНК казеїнкінази-1є, циркадіальних транскрипційних факторів Рег2, ВМаll і Сlоск та протеїнкінази SNARK у печінці, легенях та міокарді щурів.

  Скачати повний текст

Досліджено експресію генів Ifna1, Ifnar1, та Pkr у печінці щурів після часткової гепатектомії (ЧГЕ) та лапаратомії (ЛАП), які спричиняють перехід клітин печінки від спокою до проліферації та реакцію гострої фази. З'ясовано, що перехід клітин печінки від спокою до проліферації супроводжується ранньою активацією синтезу мРНК IFNalpha в клітинах Купфера з подальшою активацією в гепатоцитах синтезу Ifna1, Ifnar1, та Pkr-специфічних РНК. Показано, що реакція гострої фази в печінці після ЛАП супроводжується вираженим зниженням експресії генів Ifna1 та Pkr в клітинах Купфера. Встановлено, що активація синтезу IFNalpha після ЧГЕ не є можливою за реакції гострої фази. Доведено, що після ЧГЕ в гепатоцитах відбувається перерозподіл білка PKR тільки в цитоплазмі.

  Скачати повний текст

З використанням методів імуноблот-аналізу та Нозерн-блот гібридизації показано, що тривале низькоінтенсивне gamma-випромінювання за малих доз спричиняє зменшення вмісту цитохрому P450 2E1 та рівня мРНК Cyp2e1. Встановлено, що дія гострого високоінтенсивного gamma-випромінювання через добу після опромінення за невеликих доз призводить до збільшення, а у разі великих - до зменшення вмісту білка Cyp2e1, за цього рівень відповідної мРНК суттєво знижується за всіх застосованих доз. З'ясовано, що хронічна дія етанолу призводить до підвищення вмісту білка Cyp2e1 і не впливає на рівень відповідної мНК. У разі спільної тривалої дії двох стресорів виявлено початкове зростання вмісту ферменту, що є проявом стабілізувальної дії етанолу. Зі збільшенням тривалості експозиції вміст білка Cyp2e1 зменшується, що зумовлено дією gamma-випромінювання, яке призводить до зниження рівня мРНК Cyp2e1. Зроблено припущення, що інгибування експресії гена цитохрому P450 2E1 за дії gamma-випромінювання відбувається внаслідок загального пероксидного ураження, але може бути певною адаптивною відповіддю клітини у разі оксидативного стресу.

  Скачати повний текст

Досліджено ефекти опромінювання світлом He-Ne лазера і надвисокої частоти (НВЧ) яєць і ляльок дрозофіли на показники теплостійкості імаго, репродуктивної здатності та виходу імаго у ліній з низькою та високою статевою активністю, та їх гібридів. У дослідах на клітинах букального епітелію людини встановлено, що випромінювання He-Ne лазера надвисокої частоти викликає збільшення електронегативності ядер (ЕНЯ) та підвищення кількості гранул гетерохроматину в ядрах. Досліджено вплив інсуліну та інгібіторів біосинтезу РНК і білка на ЕНЯ. За результатами дослідження виявлено значні ефекти мікрохвильового та лазерного випромінювання на клітинному й організменому рівнях, реакція на дані фактори обумовлена генотипом.

  Скачати повний текст

Виявлено та охарактеризовано нові білки партнерів кінази S6 рибосомального білка (S6K1) методом дріжджової двогібридної системи. В результаті проведеного скринування кДНК бібліотеки ембріонів миші ідентифіковано кДНК нового S6K1-зв'язувального білка - КоА-синтази. Вперше клоновано кДНК ген, що кодує КоА-синтазу. Доведено, що КоА-синтаза має дефосфоКоА-кіназну та фосфопантотенатаденілтрансферазну активності та каталізує два останні етапи біосинтезу КоА. Вперше показано, що КоА-синтаза взаємодіє з S6K1 в клітинах дріжджів та в клітинах ссавців. Встановлено, що С-кінцеві ділянки S6K1 та КоА-синтази залучені до утворення білкового комплексу. Продемонстровано мітохондріальну локалізацію КоА-синтази методами конфокальної мікроскопії та субклітинного фракціонування з використанням специфічних антитіл. Виявлено, що КоА-синтаза не є субстратом для S6K1 та встановлено відсутність взаємовпливу обох ферментів на їх активність. Обгрунтовано структурну роль даної взаємодії та виявлено її вплив на можливість S6K1 наближатися до мітохондрії з метою фосфорилювання її мітохондріальних субстратів.

  Скачати повний текст

Вивчено молекулярні механізми регуляції гліколізу на рівні експресії 6-фосфофрукто-2-кінази/фруктозо-2,6-бісфосфатази (PFKFB) у різних органах тварин у разі гіпоксії та цукрового діабету. Установлено, що експресія PFKFB-3 та її сплайн-варіантів за умов гіпоксії посилюється, але по-різному у різних органах. У разі діабету в різних органах установлено зміни в експресії мРНК PFKFB-3 та деяких сплайс-варіантів. Виявлено нові сплайс-варіанти PFKFB-3, -4 та -1 у мишей і щурів та визначено їх нуклеотидну послідовність. З'ясовано, що варіант мРНК PFKFB-1 сітківки щура відрізняється від PFKFB-1 печінки змінами у послідовності нуклеотидів і відсутністю залишку серину, який зумовлює негативну регуляцію активності, а сплайн-варіант мРНК PFKFB-4 має делецію у бісфофатазному домені та його експресія виявилася лише у головному мозку у разі діабету.

  Скачати повний текст

  Скачати повний текст

Вперше встановлено, що найбільш типовою для пухлин різного гістогенезу є експресія ядерних рецепторів - рецепторів глюкокортикоїдів (GR) та активаторів проліферації пероксисом (РРАR), а також ТLR1-6. Одержано пріоритетні дані щодо особливостей експресії NRS та ТLR у клітинах менінгіом. Доведенo здатність бактеріальних ендотоксинів активувати експресію власних (ТLR4) і функціональних (ТLR9) Тоll-подібних рецепторів у пухлинних клітинах, що знижує чутливість останніх до апоптотичних сигналів. Вперше визначено та досліджено особливості дії принципово нової катіонної сполуки, гексадецилтрифеніл-фосфоніум-броміду, яка у достатньо низькій концентрації викликає апоптоз клітин шляхом спрямованого впливу на мітохондрії. Виявлено ефект блокування дексаметазоном процесу викликаної апоптогенними агентами передислокації цитохрому С з мітохондрій до цитоплазми, яка розширює уявлення про участь кортикостероїдних гормонів в механізмах регуляції апоптозу.

  Скачати повний текст

  Скачати повний текст

Дисертацію присвячено з'ясуванню впливу реципрокних міжлінійних заміщень хромосом на окремі показники пристосованості D.melanogaster. Вперше отримано інформацію про рівень відносної пристосованості (W) та інших показників адаптивної здатності генотипів (реальної плодючості, терморезистентності, тривалості життя, виживання за умов голоду) у разі заміщення хромосом 1,2 та 3. Визначено функціональний стан ген-ензимної системи алкогольдегідрогенази (АДГ), наявність корелятивних зв'язків між окремими показниками пристосованості у разі заміщень хромосом. Встановлено, що обмін хромосомами в межах ліній C-S, cn та vg призводить до зменшення адаптивного потенціалу генотипів і в ряді випадків супроводжується модифікацією властивостей алозилмів АДГ. Основною причиною зазначених змін є наявність маркерних мутацій та порушення генного балансу у разі штучних перебудов генотипів.

  Скачати повний текст

Розглянуто питання стимуляції раннього ембріонального розвитку тварин in vivo та in vitro і підвищення ефективності ембріобіотехнологічних методів дослідження механізмів дозрівання, запліднення ооцитів, розвитку химерних ембріональних конструкцій і трансферабельних ембріонів тварин з групи бластомерів. Теоретично і практично обгрунтовано можливості створення in vitro умов, максимально наближених до специфічного маткового середовища на ранніх стадіях ембріогенезу, а також використання факторів, складників, середовищ, здатних стимулювати ооцитарний і ембріональний розвиток. Розроблено морфологічну шкалу оцінки доімплантаційних ембріонів та спосіб гормональної корекції відтворної функції норок, досліджено закономірності та видові особливості ембріонального розвитку норок і песців. Удосконалено методи одержання химерних конструкцій з ембріонів синхронних і асинхронних стадій у норок з застосуванням електростимуляції агрегації мембран чужорідних бластомерів у корів. Запропоновано метод мікроманіпуляцій для одержання чверток деконсервованих морул і нащадків після їх трансплантації. Розроблено і експериментально перевірено "Середовище для дозрівання ооцитів корів і овець in vitro", що забезпечує одержання дозрілих, здатних до запліднення in vitro ооцитів тварин. Ефективність запропонованого середовища підтверджено одержанням ембріонів овець поза організмом та життєздатного приплоду від їх трансплантації.

  Скачати повний текст

  Скачати повний текст