Для розробки набору діагностикумів хвороби Тешена свиней підібрано оптимальні методи очистки та концентрування штаму тешовірусів свиней першого серотипу "Чернігівський-2372". Встановлено, що диференційне центрифугування з наступним ультрацентрифугуванням у градієнті густини сахарози дозволяє звільнити віруси від білків клітин хазяїна, порожніх вірусних капсидів і дефектних вірусних частинок і є придатним методом очистки вірусних препаратів для твердофазного імуноферментного аналізу.

Представлено результати створення вітчизняних тест-систем з діагностики ензоотичного енцефаломієліту (хвороби Тешена) свиней методом твердофазного імуноферментного аналізу. Охарактеризовано одержані біологічні компоненти діагностикумів та оптимізовані етапи реакції. Чутливість створеної тест-системи для виявлення антитіл до тешовірусів свиней 1-го серотипу становить 93 %, специфічність - 100 %. У сендвіч-варіанті виявлені штами, які належать до 1-го серотипу тешовірусів свиней.

Наведено результати обстеження свинарських господарств Чернігівської області щодо тешовірусів свиней. Досліджено 1296 проб, які були відібрані від клінічно здорових, хворих з ознаками енцефаломієлітів, перехворілих свиней та з предметів догляду за ними, а також від синантропних тварин і птахів та з об'єктів навколишнього природного середовища. Виділено 313 ізолятів тешовірусів свиней (24,2 % від загальної кількості відібраних проб), 168 ізолятів (53,7 % від загальної кількості досліджених проб) тешовірусів свиней першого серотипу, збудника ензоотичного енцефаломієліту. Ізоляти вірусів, виділені від синантропних тварин, мають патогенні властивості з класичними симптомами хвороби Тешена свиней.

Наведено дані щодо імунобіологічної реактивності організму свиней на експериментальне введення штамів тешо-, ентеровірусів свиней, виділених на території України, і еталонного штаму збудника тешинської хвороби. Показано, що інтрацеребральне введення штамів тешо-, ентеровірусів стимулювало в організмі поросят лейко- й еритропоез. Рівень віруснейтралізуючих антитіл у сироватках крові свиней до штамів Ч-2372, Г-31 та Tirol тешовірусів свиней, які є збудниками енцефаломієлітів, був низьким (0 - 1:16). До апатогенних штамів вірусів титри антитіл у сироватках крові становили 1:128 - 1:512. Встановлено, що розмноження в організмі поросят тешо- і ентеровірусів свиней, пасажованих у культурі клітин, не викликало в них клініко-патологічного комплексу.

Наведено дані щодо індикації 2-х ізолятів вірусу хвороби Тешена на території України: "Шевченково-05", виділеного у 2005 р. з патологічного матеріалу від свійського підсвинка з клінічними ознаками хвороби, та "Новоазовський 2013", виділеного від дикого кабана, відстріляного в сезон полювання 2013 р. Описано клінічні прояви (підвищення температури тіла до 41,4 C, слабкість, анорексія, порушення координації рухів, гіперестезію, судомні скорочення м'язів передніх кінцівок, затруднене дихання, синюшність копитець, вух та шкіри рила) та патологоанатомічні зміни (гіперемію та набряк головного мозку, синюшність носових перегородок, переповнення сечового міхура) у разі хвороби Тешена у свійського підсвинка. Наведено дані щодо відбору патологічного матеріалу від свійського підсвинка з головного мозку та дикого кабана з ректальних змивів. Детально висвітлено процедури щодо первинної індикації ізолятів у перещеплюваній культурі клітин СНЕВ у 4-х послідовних пасажах. Проведено ідентифікацію ізолятів шляхом обробки вірусовмісної суспензії хлороформом із подальшим визначенням інфекційної активності. З метою ідентифікації вірусу хвороби Тешена та визначення його антигенної спорідненості у реакції нейтралізації було відібрано вірусовмісну культуральну рідину у крайніх розведеннях, де реєстрували цитопатичну дію вірусу, та проведено наступні 3 послідовні пасажі у культурі клітин СНЕВ. Показано строки прояву цитопатичної дії ізолятів, їх інфекційну активність, а за допомогою перехресної реакції нейтралізації визначено індекси нейтралізації та антигенної спорідненості їх до виробничого вірусу хвороби Тешена штам "Перечинський 642". За результатами проведених вірусологічних та серологічних досліджень визначено, що виділені ізоляти належать до вірусу хвороби Тешена.

Наведено результати серологічних моніторингових досліджень диких свиней у розрізі районів областей України відносно хвороби Тешена. За період 2001 - 2013 років досліджено 6840 зразків сироваток крові диких кабанів, відстріляних із територій 374-х районів усіх адміністративних областей України. Дослідження сироваток крові проводили мікрометодом реакції нейтралізації у культурі клітин СНЕВ. Відбір сироваток крові від диких кабанів здійснювався у мисливські сезони й не передбачав стеоретипу постійного відбору зразків із певних районів території України. За результатами проведеного ретроспективного моніторингу визначено і графічно зображено території районів областей України, де відбиралися та виявлені позитивні сироватки крові.

Наведено результати виявлення 2-х ізолятів вірусу ензоотичного енцефаломієліту свиней з території України: від домашнього підсвинка і дикого кабана. Ізолят вірусу ензоотичного енцефаломієліту свиней "Шевченково-2005" був виділений від хворого підсвинка у 2005 р. у приватному секторі на території Київської області. Ізолят вірусу ензоотичного енцефаломієліту свиней "Новоазовський-2013" був виділений від відстріляного дикого кабана з території Луганської області. Спершу було проведено індикацію ізолятів вірусу у культурі клітин СНЕВ з їх подальшою ідентифікацією за чутливості до хлороформу. Для виявлення РНК вірусу ензоотичного енцефаломієліту свиней було використано полімеразну ланцюгову реакцію з наступним секвенуванням VP1 кДНК. Результати дослідження показали, що згадані вище ізоляти відносяться до першої групи Teschovirus - PTV 1. Розробленими праймерами, які були б специфічні для майже всіх серотипів Teschoviruses, проаналізовано нуклеотидні послідовності, що кодують VP 1 із 11 доступних серотипів. Це надало змогу виявити консервативний регіон за допомогою дизайну олігонуклеотидных праймерів (PTV-F, PTV-R). Філогенетичний аналіз амінокислотних послідовностей капсидного білка VP 1 Teschoviruses українських ізолятів і різних серотипів показали, що віруси України відносяться до першої Teschovirus групи (PTV 1). Виявлені деякі точкові мутації ізолятів можуть бути пов'язані з їх рекомбинацією, що властиво для всіх членів родини Picornaviridae. Виявлені послідовності українських ізолятів було занесено в GenBank (KJ081865, KJ081866 та KJ081867).

Індекс рубрикатора НБУВ: П873.325.4

Рубрики:

Інфекційний енцефаломієліт свиней

Шифр НБУВ: РА430376 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Хвороба Тешена (ХТ) останнім часом реєструється рідко, однак помірні або безсимптомні інфекції, зумовлені Teschovirus A, виявляються по всьому світу. Мета роботи - дослідити антигенні та патогенні властивості штамів Teschovirus A і Sapelovirus A, які циркулюють як серед свинопоголів'я, так і серед синантропних тварин на території України. Біологічні, фізико-хімічні та антигенні властивості вірусів вивчали в перещеплюваних лініях культур клітин СНЕВ і ВНК-21. Гіперімунні сироватки крові до штамів вірусів отримували за модифікованою схемою на кролях. Типову належність вірусів визначали в реакції нейтралізації, видову ідентифікацію - у полімеразній ланцюговій реакції зі зворотною транскрипцією. Патогенні властивості штамів вірусів вивчали на поросятах двохмісячного віку при інтрацеребральному зараженні. Зі 1051 проб матеріалів відібраних від свиней і синантропних тварин виділено 233 ізоляти вірусів. Встановлено, що ізоляти вірусів і виділені від синантропних тварин мають біологічні, фізико-хімічні та антигенні властивості, притаманні збуднику ХТ. Установлено, що віруси, виділені від кота, курки та дикого гусака, патогенні для свиней. Від свиней виділено непатогенні штами Т 3 і Ч 878 нових серотипів Teschovirus A та штам Ч 881, який рекласифіковано як Sapelovirus A нового генотипу, а також штами Г 31 і Д 32 Teschovirus A відомих серотипів, які можуть викликати енцефаломієліти у свиней. Встановлено залежність імуногенних властивостей штамів вірусів від джерел їх виділення. Віруси, виділені з ректальних і назальних змивів мають більш високу імуногенність, ніж віруси, виділені з центральної нервової системи. Встановлено, що штами вірусів, виділені від синантропних тварин, мають біологічні, фізико-хімічні й антигенні властивості, притаманні збуднику ХТ. Штами вірусів, виділені від кота, курки та дикого гусака, патогенні для свиней. Таким чином, синантропні тварини та птиця можуть бути джерелом інфекції та фактором передачі збудника ХТ. Серед свинопоголів'я циркулюють штами Teschovirus A відомих серотипів, які переважною більшістю не патогенні для свиней, а також виявлено непатогенні штами Teschovirus A нових серотипів і Sapelovirus A нового генотипу. Встановлено, що віруси, виділені з ректальних і назальних змивів, мають більш високі імуногенні властивості, ніж віруси, виділені з центральної нервової системи. За результатами проведених досліджень штами Т 3 і Ч 878 нових серотипів Teschovirus A можуть бути рекомендовані Міжнародному комітету з таксономії вірусів як еталонні.

Індекс рубрикатора НБУВ: П821.219.325.4,022 + П873.325.4-8,022

Рубрики:

Вакцини проти інфекційного енцефаломієліту свиней

Інфекційний енцефаломієліт свиней

Шифр НБУВ: ДС49991 Пошук видання у каталогах НБУВ