Досліджено вплив різних доз гонадотропінів (СЖК/ЛХГ) на кількісні та якісні характеристики ооцитів мишей лінії СВА у порівнянні з ооцитами мишей тієї ж лінії, які були отримані у природному циклі. Показано, що застосування дози 5 IU призводить до збільшення кількості ооцитів, які не відрізняються за своїми характеристиками від контролю. Дози 10 та 15 IU викликають зростання кількості ооцитів з погіршеними морфологічними характеристиками, з дегенерацією ядерного матеріалу та партеногенетично активованих ооцитів.

Розглянуто можливість короткочасного зберігання та заморожування ембріонів ссавців з використанням посудини X-5 за умов, що відрізняються від лабораторних. Успішне застосування харківського заморожувача, що базується на пасивному остиганні термоблока, зануреного в горловину посудини Дьюара Х-34Б на глибину L = 11,5 см, дозволило визначити оптимальні параметри його використання в посудині Х-5 (L = 4,4 см). Контроль та підтримання температури проведено шляхом застосування позистора СТ-17-380 Ом з точністю до 2 °C. Високий рівень збереження заморожено-розтанутих ембріонів миші (95 %, n = 38/40) свідчать про можливість застосування запропонованого пристрою за реальних умов, до яких слід віднести широку варіацію навколишньої температури, процес транспортування та відсутність електроенергії.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е60*333.12с8

Рубрики:

Загальна зоологія

Шифр НБУВ: Ж14260 Пошук видання у каталогах НБУВ 
Повний текст  Наукова періодика України 

При двух видах иммунного повреждения яичников у мышей (ксеногенными антиовариальными антителами и иммунизацией аллогенным яичником) установлено нарушение мейотического созревания ооцитов в культуре. Нарушение оогенеза сопровождалось гибелью фолликулярных клеток преимущественно по апоптотическому пути, однако при иммунизации аллогенным яичником активировался и некротический путь их гибели.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е60*333.12 с3 + Р454.991

Рубрики:

Загальна зоологія

Кріоконсервація

Шифр НБУВ: Ж14260 Пошук видання у каталогах НБУВ 
Повний текст  Наукова періодика України 

Вивчено комплексне застосування методів цитоморфологічної оцінки, кріоконсервування, культивування та запліднення in vitro для одержання зародків великої рогатої худоби (ВРХ) з деконсервованих ооцитів корів. Вивчено вплив різних концентрацій гліцерину та пропандіолу у вітрифікаційному розчині на життєздатність гамет у разі заморожування ооцит-кумулюсних комплексів корів. Установлено, що залежно від стадії мейотичного дозрівання ооцитів, характеру прилеглих їх клітин кумулюса вони мають різну чутливість до низьких температур. Визначено ефективність різних способів виведення кріопротекторів за допомогою сахарози після розморожування гамет корів. Досліджено застосування різних культуральних систем для подальшого розвитку за умов in vitro ембріонів ВРХ, одержаних з деконсервованих ооцитів. Проведено морфологічний і цитогенетичний аналіз незрілих і зрілих гамет корів, ранніх зародків ВРХ, одержаних з деконсервованих, дозрілих і запліднених in vitro яйцеклітин корів.

  Скачати повний текст

Індекс рубрикатора НБУВ: П60-345с25 + Е60*333.12-636-601.2

Рубрики:

Велика рогата худоба

Загальна зоологія

Шифр НБУВ: РА361475 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Установлено, що фактор некрозу пухлин-<$Ealpha> (ФНП-<$Ealpha>), інтерлейкін-2 (ІЛ-2) та інтерферон-<$Ealpha> (ІФН-<$Ealpha>) in vitro дозозалежно пригнічують мейотичне дозрівання ооцитів, ізольованих від кумулюсних клітин. Вплив цитокінів на ооцити, культивовані у складі кумулюсно-ооцитарних клітинних комплексів менш виражений. Виявлено пошкоджувальну дію ФНП-<$Ealpha>, ІЛ-2 та ІФН-<$Ealpha> на життєздатність клітин фолікулярного оточення ооцитів. Установлено, що одним з механізмів супресивного впливу цитокінів на дозрівання ооцитів є порушення функціонування мітохондрій, що супроводжується пошкодженням іонотранспортних систем. Показано, що ІЛ-2 та ФНП-<$Ealpha> пригнічують мейотичне дозрівання ооцитів за умов імунного пошкодження яєчників великими дозами антиоваріальних антитіл. З'ясовано, що за присутності ІФН-<$Ealpha> відбувається стимулювання ооцитогенезу, що має важливе значення для обгрунтування доцільності використання препаратів ІФН за умов лікування безпліддя хворих з аутоімунними процесами яєчників, застосування ін'єкцій малої дози антитіл знижує пригнічувальний вплив ІФН-<$Ealpha>, ІЛ-2 та ФНП-<$Ealpha> на мейотичне дозрівання ооцитів. На підставі одержаних результатів запропоновано твердження, що антиоваріальні антитіла за малих доз здійснюють протективний ефект на ооцитогенез за патологічного впливу даних цитокінів.

  Скачати повний текст

Індекс рубрикатора НБУВ: Е60*333.12

Рубрики:

Загальна зоологія

Шифр НБУВ: РА358903 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Досліджено кальцій-залежні механізми оогенезу мишей, що має фундаментальне значення для розуміння процесів нормального розвитку, дозрівання та активації яйцеклітини. Шляхом використання блокаторів кальцієвих каналів (верапамілу та амілориду), різних концентрацій Ca²⁺ та антиоваріальних антитіл у середовищі культивування отримано нові дані про участь кальцій-залежних механізмів у процесі відновлення ооцитами миші мейозу, який є абсолютно необхідним для нормального запліднення і подальшого розвитку плода, а також чинником жіночого безпліддя аутоімунного походження. Встановлено, що здатність ооцитів до відновлення мейозу in vitro під час їх неферментативного виділення з яєчника мишей на різних стадіях естрального циклу зумовлена розмірами фолікула, ооцита, стадією естрального циклу та є кальцій-залежною. Отримані результати свідчать, що на оолемі ооцитів миші функціонують кальцієві канали L- і T-типу, активність яких зумовлена стадією естрального циклу та пов'язана з механізмами відновлення мейозу ооцитами. Кальцієві канали залучаються в механізм пригнічуючої дії антиоваріальних антитіл на відновлення мейозу ооцитами. Шляхом встановлення ролі кальцієвих каналів L- і T-типу в дії антиоваріальних антитіл на ооцити мишей на різних стадіях естрального циклу виявлено механізм розвитку безпліддя аутоімунного походження.

Запропоновано підходи до підвищення життєздатності деконсервованих ооцит-кумулюсних комплексів корів з наступним їх дозріванням і заплідненням in vitro. Досліджено вплив різних концентрацій гліцерину та пропандіолу в вітрифікаційному розчині під час заморожування ооцит-кумулюсних комплексів корів. Визначено ефективність різних способів виведення кріопротекторів за допомогою сахарози після розморожування гамет корів. Встановлено різну чутливість ооцитів корів до дії низьких температур залежно від характеру оточуючих їх клітин кумулюсу. Проведено морфологічний і цитогенетичний аналіз незрілих і зрілих гамет корів, ранніх зародків великої рогатої худоби, отриманих з деконсервованих, дозрілих і запліднених in vitro яйцеклітин корів.

  Скачати повний текст

Індекс рубрикатора НБУВ: Е60*333.12*550.324

Рубрики:

Загальна зоологія

Шифр НБУВ: РА316533 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Визначено ефективність способів заморожування незрілих ооцитів миші та корови у широкому діапазоні швидкостей охолодження нагрівання. Вивчено вплив складових етапів кріоконсервування на збереженість досліджених ооцитів з метою оптимізації даних етапів. Запропоновано спосіб заморожування незрілих ооцитів миші та корови, який передбачає застосування надвисокої швидкості охолодження-нагрівання та кріозахисного середовища, що складається з етиленгліколю та сахарози. Встановлено, що для заморожування незрілих ооцитів даних тварин за лінійним і експоненціальним режимами охолодження ефективним кріоконсервантом є 1,5 М розчин етиленгліколю. Виявлено, що скорочення часу попередньої витримки в 10 %-му розчині етиленгліколю перед перенесенням у середовище для заморожування не знижує рівень збереженості незрілих ооцитів миші та корови після заморожування-відтавання, це дозволяє уникнути попередньої еквілібрації як етап з повного циклу заморожування-відтавання. Показано, що за умов заморожування незрілих ооцитів миші та корови з надвисокою швидкістю охолодження-нагрівання та різних концентрацій кріозахисного середовища, яке складається з етиленгліколю та сахарози, ефективною є концентрація 53 %. У порівняльному аспекті проаналізовано методи кріоконсервування незрілих ооцитів зазначених тварин і складових етапів цих методів з використанням низьких, високих і надвисоких швидкостей охолодження-нарівання. Встановлено, що ефективними є експоненціальний режим охолодження та надвисока швидкість заморожування, за яких одержано високі показники виживаності (за умов оцінювання режиму заморожування) ооцитів миші та корови (<$E97,4~ symbol С ~1,6> і

За однакових експериментальних умов досліджено особливості селективності та проникності трьох клонованих низькопорогових кальцієвих каналів (НПКК), функціонально експресованих в ооцитах Xenopus laevis. Установлено, що канали, сформовані різними <$Ealpha 1>-субодиницями, відрізняються своєю макроскопічною провідністю відносно двовалентних катіонів <$Eroman {Ca sup 2+ ,~Sr sup 2+ }> та <$Eroman Ba sup 2+>, афінністю до <$Eroman Ca sup 2+> й особливостями взаємодії з <$Eroman Ca sup 2+>. Визначено константи дисоціації для комплексів різних <$Eroman {Ca sub v 3}>-каналів з <$Eroman Ca sup 2+>. Показано, що всі <$Eroman {Ca sub v 3}>-канали мають помірну проникність щодо одновалентних катіонів навіть за фізіологічних концентрацій зовнішньоклітинного <$Eroman Ca sup 2+>. Зроблено припущення, що в НПКК декілька механізмів зумовлюють здійснення селективності. Зазначено, що їх селективність стосовно катіонів лужноземельних металів (<$Eroman {Ca sup 2+ ,~Ba sup 2+ }> та <$Eroman Sr sup 2+>) переважно зумовлена специфічним впливом <$Eroman {Ca sup 2+ ,~Ba sup 2+ }> та <$Eroman Sr sup 2+> на ймовірність відкриття цих каналів, а також селективний транспорт <$Eroman Ca sup 2+> за присутності переважної концентрації <$Eroman Na sup 2+> здійснюється за рахунок різної афінності цих катіонів до певного місця зв'язування всередині пори каналу. Розвинуто сучасні уявлення про механізми селективності та проникності потенціалзалежних кальцієвих каналів і, зокрема, НПКК.

Досліджено проаритмічну дію нейролептиків галоперидолу, пімозиду та флуснірилену, яка полягає в ефективному блокуванні калієвих каналів HERG, взаємодії з їх відкритим станом. Зроблено висновок, що канали HERG є чутливими до тестостерону, здатного понижувати їх чутливість до нейролептиків і відігравати протекторну роль у разі дії проаритмічних агентів. Доведено, що minK здатний модифікувати чутливість каналів HERG до препаратів, механізм дії яких включає взаємодію з інактивним станом каналу.

Досліджено експресію мРНК фактора некрозу пухлин alpha (ФНП-alpha) та його рецепторів I і II типу у поодиноких ооцитах на стадіях зародкового пухирця та метафази II (формування першого полярного тільця) у мишей лінії CBA за допомогою методу полімеразної ланцюгової реакції. Виявлено експресію мРНК ФНП-alpha, але не його рецепторів, на обох стадіях відновлення мейозу, у цьому випадку в ооцитах із зародковим пухирцем її рівень був вірогідно вищим, ніж у клітинах з першим полярним тільцем, що вказує на можливу роль ФНП-alpha у мейотичному дозріванні. Одержані результати є важливими для розуміння молекулярних механізмів, які регулюють оогенез і фолікулогенез.

За допомогою стандартної методики двоелектродної фіксації потенціалу досліджено вплив іонів нікелю на Ca<^>2+-, Sr<^>2+- і Ba<^>2+-струми рекомбінантних низькопорогових кальцієвих каналів (Cav3.1 і його мутант, у якого глутамін (Q) в еквівалентній позиції до Н191 Cav3.2-каналу був замінений гістидином), що функціонально експресовані в ооцитах Хenopus. Установлено, що інгібування цих каналів здійснюється шляхом зв'язування нікелю з двома сайтами високо- та низькоафінним.

Описано раніше невідомий феномен виживання ембріонів in vitro впродовж тривалого періоду часу без зниження їх життєздатності. Через 6 діб культивування поза організмом на підтримувальну фідерному моношарі бластоцисти мишей зберігали свою життєздатність з відмінною морфологічною якістю і були здатні для використання в подальших дослідженнях, що свідчить про високу регуляторну здатність епітеліальних клітин маткового походження в системі in vitro. Через 9 днів культивування клітини епітелію продовжували утворювати фідерний моношар з високим проліферативним ростом.

Досліджено вплив різних швидкостей заморожування-відтаювання на життєздатність деконсервованих ооцит-кумулюсних комплексів корови. Встановлено, що збереженість ооцитів корови після заморожування з повільними, високими та надвисокими швидкостями теплообміну становить (<$E 11,4~symbol С~5,4>) %, (n = 3/40), (<$E 6,7~symbol С~3,2>) %, (n = 4/60), (<$E 14,0~symbol С~4,9>) % (n = 7/50), відповідно.

Досліджено вплив обробки гонадотропними гормонами самок мишей з метою виклику в них суперовуляції на морфологічні показники та електричні параметри ооцитів. Гормональну стимуляцію здійснювали за трьома схемами: ГСЖК + лХГ; ГСЖК; лХГ. За методом електропорації визначено питому електричну провідність ооцитів миші, які одержані в результаті суперовуляції та у природному циклі тварин. Показано, що у загальному пулі ооцитів, які були одержані в результаті суперовуляції за схемами 1 і 2, присутні дві групи ооцитів, які не відрізняються між собою за морфологічними ознаками, але відрізняються за своїми електричними параметрами та стійкістю до електричного пробою. Показано, що застосування гормональної стимуляції призводить до вірогідного збільшення морфологічних порушень ооцитів на відміну від спонтанної овуляції. Проведене дослідження свідчить про найбільш суттєвий вплив на якість ооцитів фолікулостимулюючого гормону. Внаслідок дії ГСЖК до овуляції здатні ооцити, які суттєво різняться за своїм функціональним потенціалом розвитку, що, в свою чергу, віддзеркалюється на їх електричних параметрах.

Проаналізовано вплив імпульсного електричного поля на розвиток \i in vitro \i0 ооцит-кумулюсних комплексів (ОКК) миші та корови, розроблено нові підходи щодо оцінювання їх якості. Зазначено, що вперше застосовано стимуляцію імпульсним електричним полем незрілих ОКК миші та корови з метою підвищення рівня дозрівання ооцитів у системі \i in vitro\i0. Запропоновано об'єктивний спосіб оцінювання стимулювального впливу на розвиток ОКК за зміною площ ооцита і кумулюсу. Вивчено вплив різних видів стимуляції дозрівання (гормональної стимуляції та стимуляції імпульсним електричним полем) на морфофункціональні особливості ооцитів миші. Наведено результати порівняльного аналізу стимульованих і спонтанно дозрілих у природному статевому циклі ооцитів миші за морфологічним станом, електропровідністю та здатністю до запліднення в системі \i in vitro\i0. Зазначено, що гормонально стимульовані до дозрівання ооцити неоднорідні за якістю всередині пулу й розділяються на дві групи за електропровідністю. Імпульсно стимульовані ооцити за значеннями електропровідності подібні до спонтанно овульованих ооцитів і розділення на групи не виявляють. Стимульовані імпульсним полем ооцити не відрізняються вірогідно за рівнем запліднення від спонтанно дозрілих ооцитів. Запліднюваність гормонально стимульованих ооцитів є вірогідно більш низькою у порівнянні з ооцитами, дозрілими в природному статевому циклі.

Вперше встановлено дозову залежність виживання ізольованих ооцитів II на поживному середовищі після їх опромінення гамма- та рентгенівськими променями в різних дозах. Проаналізовано вплив локального та тотального опромінення самок щурів на процес овуляції та коливання рівня гонадотропних гормонів: показано, що зміни концентрації фолікулостимулювального та лютеїнізувального гормонів в сироватці крові тварин були найбільш вираженими на 7-му добу після опромінення. З'ясовано корелятивні зв'язки між величиною дози за різних режимів опромінення тварин і виходом ооцитів II в залежності від тривалості пострадіаційного періоду. Доведено, що терміни відновлення статевої функції самок щурів знаходяться у прямій залежності від величини дози опромінення та тривалості пострадіаційного періоду. Вперше встановлено появу радіостимулювального ефекту на продукцію ооцитів II та синтез гонадотропінів за умов локального опромінення таза та голови в дозах 0,5 та 5,0 Гр відповідно.