Індекс рубрикатора НБУВ: Е70*445.4-642

Рубрики:

Біологія людини

Шифр НБУВ: Ж21341/а Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Е70*445.4

Рубрики:

Біологія людини

Шифр НБУВ: Ж26810 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Представлено результати цитогенетичного аналізу клітин злоякісної лімфоми людини перещеплюваної лінії Namalwa після їх інкубації з субтоксичними дозами інгібіторів реплікації та синтезу ДНК - етопозиду та флударабіну. Модальний клас хромосом у інтактних клітинах розташовувався в диплоїдній області; частка аберантних клітин дорівнювала (<$E 16,0~symbol С~0,5>) %. Під впливом етопозиду підвищувався вміст клітин з абераціями хромосом - від (<$E 26,1~symbol С~2,9>) до (<$E 39,8~symbol С~1,7>) % (в залежності від тривалості впливу та дози хіміопрепарату) та збільшувалась кількість поліплоїдних клітин зі збереженням модальної лінії у диплоїдній області. Після культивування з флударабіном рівень клітин з абераціями хромосом досягав (<$E 57,1~symbol С~2,9>) %; відзначено два модальних класи у білядиплоїдній і поліплоїдній областях. У разі дії досліджених препаратів відзначено підвищення числа аберацій хроматидного типу, найчастіше у хромосомах 1, 2, 5, 6, 7, 11, 13, 14, 16 і 17. Одержані результати свідчать про чутливість клітин лінії Namalwa до субтоксичних концентрацій інгібіторів реплікації та синтезу ДНК і про можливість виникнення нових життєздатних клонів, стійких до дії хіміопрепаратів.

За даними статево-вікової структури населення Харкова та медичної статистики захворюваності на рак розраховано популяційну частоту онкопатології. Виявлено, що за сучасних умов рак може розвинутися протягом життя у 7 % населення. Встановлено, що успадкованість раку легень та шлунка складає 45 - 53 %, частка середовищного фактора - 47 - 55 %. Обгрунтовано припущення щодо існування схильності до формування взагалі онкологічного фенотипу. Запропоновано концепцію онкологічного генеалогічного синдрому, існування якого доведено за допомогою генетичного аналізу. Встановлено, що генетична схильність до раку легенів та шлунка складає більше ніж 70 %. З'ясовано значення фактора професійної шкідливості, що підвищує ймовірність розвитку даної патології, але не впливає на локалізацію пухлини. Зазначено, що успадковуваність віку маніфестації раку у харківській популяції складає 85 %. Встановлено явище антипатії, доведено, що захворювання у нащадків починається раніше, ніж у батьків. Визначено, що фактором підвищеного ризику розвитку раку у нащадка є рак легенів у батьків, наявність захворювання у батька, жіноча стать у особи, що консультується.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е70*445.4

Рубрики:

Біологія людини

Шифр НБУВ: Ж21341/а Пошук видання у каталогах НБУВ 

Представлены результаты определения активности протеасомы в изолированных моноцитах людей с различными аллельными вариантами генов, кодирующих большие мультифункциональные протеазы LMP2 (<$E roman {Arg sub 60 ~symbol О~His}> полиморфизм) и LMP7 (<$E roman {Lys sub 145 ~symbol О~Gln}> полиморфизм). Установлено, что трипсиноподобная активность протеасомы при генотипе Arg/Arg в 1,6 раза (P = 0,19) выше, чем при генотипе His/His, и в 2,0 раза (P = 0,03) меньше по сравнению с гетерозиготами (Arg/His). Наибольшая химиотрипсиноподобная активность протеасомы наблюдалась у гетерозигот (на 29,7 % выше, чем при генотипе Arg/Arg, P = 0,43), а наименьшая - у гомозигот His/His (на 29,7 % меньше по сравнению с генотипом Arg/Arg, P = 0,40). При определении уровня экспрессии РНК LMP2 и LMP7 в изолированных моноцитах с помощью обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции установлено, что существенных отличий в активности экспрессии генов указанных субъединиц иммунопротеасомы у лиц с различным генотипом не наблюдается. Полученные результаты свидетельствуют о влиянии аллельного полиморфизма гена LMP2 на пептидазную активность иммунопротеасомы.

Установлено нові функціональні зв'язки між фосфатазою PTEN і білками-учасниками різних сигнальних шляхів за допомогою двогібридної дріжджової системи та підтвердити виявлену у дріжджах взаємодію з використанням молекулярно-біологічних методів за умов in vitro та у системах вищих еукаріотів. За допомогою двогібридного скринування кДНК-бібліотек з використанням мутантних форм фосфатази PTEN/S3 70D і <$EDELTA roman {N"/"PTEN}> як "байтів" ідентифіковано 9 PTEN-зв'язувальних білків, до яких належать переносник жирних кислот FABP4 репресор транскрипції гена aP2 білок AEBP1. Специфічність знайдених взаємодій підтверджено за допомогою аналізу статевого злиття дріжджів. Одержано моноклональні антитіла проти FABP4 та поліклональні антитіла проти фосфатази PTEN. Доведено утворення комплексу PTEN/FABP4 in vitro. Визначено <$Eroman {K sub D }> міжбілкового комплексу, що становить 2,78 мкМ. Установлено, що експресія PTEN у клітинах лінії NIH3T3L1 зростає за диференціації, що корелює з динамікою експресії FABP4. Показано можливість утворення комплексу PTEN/FAP4 в адипоцитах NIH3T3L1. Запропоновано модель функціонування фосфатази PTEN у клітинах жирової тканини.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е70*445.4

Рубрики:

Біологія людини

Шифр НБУВ: Ж21341/а Пошук видання у каталогах НБУВ 

Изучение структурных и эпигенетических изменений клеточного генома, ассоциированных с раковыми заболеваниями, является важнейшим направлением в понимании механизмов канцерогенеза. Для исследования этих изменений разработана технология ДНК-микрочипов на основе NotI-связывающих клонов. С помощью данной технологии проанализированы 28 образцов хирургически удаленных опухолей рака шейки матки для выявления метилирования, делеций или амплификаций в NotI-клонах хромосомы 3 человека. Идентифицированы изменения в 109 из 182 NotI-клонах с различной частотой встречаемости. Для 17-ти локусов генов эти изменения встречаются более чем в 35 % случаев, что указывает на возможную связь этих генов с развитием данного заболевания.

В огляді показано роль метилування ДНК у функціонуванні нормальної та ракової клітини. Висвітлено значення метилування в функціонуванні систем, залучених до формування фенотипу лікарської резистентності злоякісних клітин (білків - регуляторів клітинного циклу, репарації ДНК-аддуктів, транспортних систем, систем детоксикації й адгезії). Розглянуто перспективи протипухлинної терапії, спрямованої на регуляцію метилування ДНК за посередництвом гомоцистеїну та деметилувальних агентів.

Публічну базу даних із серійного аналізу генної експресії (SAGE) використано для ідентифікації потенційних молекулярних маркерів астроцитарних гліом людини. У ході порівняння дев'яти SAGE-бібліотек гліобластом, 11 SAGE-бібліотек анапластичних астроцитом, восьми SAGE-бібліотек дифузних астроцитом і п'яти SAGE-бібліотек нормального головного мозку виявлено 57 генів, рівень експресії яких був більш ніж у 5 разів вищим ($E p~symbol Г~0,05>) в астроцитарних гліомах відносно нормального головного мозку. Серед змін експресії генів, які відбуваються на ранньому етапі формування астроцитом та виявляються і на наступних етапах їх розвитку, деякі модифікації є характерними лише для високозлоякісних стадій розвитку пухлин і відсутні в пухлинах низького ступеня злоякісності. Результати аналізу експресії виявлених генів можна використовувати для молекулярної класифікації гліальних пухлин, діагностики, прогностичної оцінки пухлин і визначення потенційних мішеней протипухлинної терапії.

Исследовано влияние эпоксипроизводного дефосфорилированного <$E 2 prime , 5 prime>-триолигоаденилата (<$E 2 prime , 5 prime>ApApAepoxy), устойчивого к действию клеточной фосфодиэстеразы, на культивируемые in vitro клетки нейробластомы человека линии IMR 32. Через 22 ч после введения в среду <$E 5~cdot~10 sup -6~roman M> <$E 2 prime , 5 prime>ApApAepoxy количество культивируемых клеток уменьшалось на 20 % (<$E P~<<~0,05>), а содержание белка в клетках увеличивалось в среднем на 52 % (<$E P~<<~0,01>) по сравнению с контролем. Обнаружено, что активность <$E roman {Na sup + , K} sup +>- и <$E roman {Ca sup 2+ , Mg} sup 2+>-АТФаз в микросомальной фракции, полученной из клеток, которые культивировались в присутствии <$E 2 prime , 5 prime>ApApAepoxy, была вдвое ниже (<$E P~<<~0,001>), чем в контрольных клетках. Полученные данные свидетельствуют о том, что <$E 2 prime , 5 prime>ApApAepoxy обладает антипролиферативной активностью. Согласно результатам настоящего исследования, антипролиферативное действие <$E 2 prime , 5 prime>ApApAepoxy может быть связано с тем, что это производное олигоаденилата существенно модулирует активность <$E roman {Na sup + , K} sup +>- и <$E roman {Ca sup 2+ , Mg} sup 2+>-АТФаз.

Уперше одержано й охарактеризовано монокліальні антитіла до N-кінцевого SH3A домену адаптерного білка Ruk/CIN85. Досліджено особливості експресії ізоформ Ruk/CIN85 у пухлинах нирки, передміхурової залози та головного мозку людини на рівні мРНК та на рівні білка. Установлено зниження, а також підвищення експресії повнорозмірної форми Ruk/CUIN85 у зразках світлоклітинної карциноми нирки людини у порівнянні з відповідними контрольними зразками. Виявлені зміни у рівні експресії <$Eroman {Ruk sub I "/"CINK85}> корелюють зі ступенем злоякісності досліджених зразків пухлин. Показано, що зниження рівня експресії <$Eroman {Ruk sub I "/"CINK85}> у зразках світлоклітинної карциноми нирки людини супроводжується змінами субклітинної локалізації адаптерного білка - транслокацією до ядра та переважним накопиченням у примембранній зоні. Низький рівень експресії або практичну відсутність p85 продемонстровано у зразках аденокарцином передміхурової залози людини, а у разі доброякісної гіперплазії детектовано значний поліморфізм у рівні експресії досліджуваного адаптерного білка. Серед аденокарцином мінімальний рівень експресії Ruk/CINK85 відповідав зразкам з найагресивнішими параметрами злоякісного росту (ступінь злоякісності <$Eroman {G sub 3 ~-~G sub 4 }>). Показано суттєве зниження рівня експресії <$Eroman {Ruk sub I "/"CINK85}> у центральній ділянці зразків гліобластом у порівнянні з периферійною ділянкою, що обернено корелює з рівнем експресії рецептора епідермального фактора росту (ERGFR).

Зазначено, що мікроРНК (miRNAs) - це малі некодуючі РНК, що негативно регулюють експресію генів на посттранскрипційному рівні та беруть участь у процесах розвитку, диференціювання й апоптозу клітин, а також виконують важливу роль у пухлинному процесі. В огляді обговорено біогенез miRNA, функції цих молекул у нормальних клітинах, зміни набору miRNA в пухлинних клітинах і роль протипухлинних та онкогенних miRNAs в пухлинній прогресії.

Одержано моно- (МКА) та поліклональні (ПКА) антитіла у порівнянні з рекомбінантними GST-кон'югованими формами білків, що вміщують відповідні N- та C-кінцеву частини адаптерного білка Ruk/CIN85. Проаналізовано профілі експресії ізоформ (ПЕІ) Ruk/CIN85 та їх субклітинну локалізацію (СКЛ) у клітинних лініях різного тканинного походження та зразках меланоми людини. Методи: рекомбінантні GST-кон'юговані фрагменти Ruk/CIN85 (GST-3SH3/CIN85 і GST-Ruks) експресовано в бактеріальній системі з подальшим афінним очищенням на глутатіон-сефарозі. Для одержання МКА у порівнянні з 3SH3 фрагментом CIN85 використано гибрідомну технологію. ПКА у порівнянні з C-кінцевим суперспіралізованим доменом Ruk очищено з сироватки імунізованого кроля афінною хроматографією на Ruks-сефарозі. ПЕІ Ruk/CIN85, їх олігомеризацію та СКЛ вивчено за допомогою методів Вестерн-блот аналізу, імунопреципітації та імунофлуоресцентної мікроскопії. Висновки: профілі експресії множинних ендогенних варіантів Ruk/CIN85 і здатність до формування олігомерних комплексів між різними ізоформами є характерними для кожної дослідженої лінії клітин. Не виключено, що такі особливості можуть визначати специфічну біологічну значимість ізоформ Ruk/CIN85 у різних типах клітин залежно від клітинного контексту. Наслідком високого рівня експресії повнорозмірної форми RukI/CIN85 у зразках меланоми людини може бути порушення контролю процесів проліферації та апоптозу у трансформованих меланоцитах. Охарактеризовані антитіла можна використовувати для вивчення експресії та функцій Ruk/CIN85 у пухлинах людини.

Досліджено експресію та локалізацію білкового продукту онкогена PT1-1/eEF1A у пухлинах передміхурової залози людини, а також визначено можливі функції PT-1 у трансляційному процесі. На клінічному матеріалі виявлено підвищену експресію eEF1A та/або білка PT1 в аденокарциномах передміхурової залози людини у порівнянні з експресією в умовно нормальних тканинах. У більшості пухлин показано дифузне цитоплазматичне поширення антигену, у деяких пухлинах спостережено чітку ядерну локалізацію антигену. Проведено експериментальні дослідження та показано, що модифікований трипсином eEF1A, за допомогою якого було змодельовано білковий продукт онкогена PT-1, здатний брати участь в обміні нуклеотидфосфатів, утворювати неканонічні третинні комплекси з деацилованою <$Eroman {тРНК sup Фен }> та ГДФ, а також брати участь у синтезі поліфенілаланінового ланцюга в безклітинній системі трансляції полі (U), хоча з меншою ефективністю, ніж нативний eEF1A. У дослідах in vitro під час визначення помилкового включення дейцину за умов трансляції полі(U) за участі аналога білкового продукту PTI-1, було виявлено підвищення помилок трансляції майже у шість разів у порівнянні з нативним eEF1A.

Мета: вивчення взаємозв'язку між передчасною конденсацією хромосом і схильністю клітин до злоякісної трансформації. Методи: стандартні методи цитогенетичного аналізу клітин кісткового мозку (ККМ) і культивованих нормальних і пухлинних клітин. Результати: проведено порівняльний аналіз відношення частоти виявлення клітин із передчасною конденсацією хромосом (РСС) (арешт клітин у G2/M фазі) до клітин, що діляться, в культурах іморталізованих клітин людини кровотворного походження та злоякісно трансформованих (ЗЯТ) клітин рака легені людини лінії A-549, а також у популяціях ККМ двох ліній миші: лінії BALB/c з високою схильністю до розвитку мієлом і C57BL/6, без такої схильності. Виявлено, що в популяціях ККМ мишей низькоракової лінії C57BL/6 відношення клітин із РСС до тих, що діляться, в 2 - 3 рази менше, ніж в інших досліджених клітинних популяціях. Іморталізовані та ЗЯТ клітинні лінії людини характеризувалися високою частотою присутності клітин із РСС. У клітинах сублінії A-549R, що характеризується пригніченням ознак злоякісності, цей показник є помітно нижчим, ніж у клітинах вихідної лінії A-549. Висновки: одержані дані дозволяють припустити наявність зв'язку між порушенням проходження клітинами точки перевірки під час переходу від G2 фази клітинного циклу до мітозу та підвищеною генетичною гетерогенністю їх нащадків, асоційованою зі схильністю клітин до іморталізації та злоякісної трансформації.

Індекс рубрикатора НБУВ: Р56-1 + Е70*445.4

Рубрики:

Онкологія

Біологія людини

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ