Promoter hypermethylation mediates gene silencing in many neoplasms. Acute leukemia has been reported to harbor multiple genes aberrantly silenced by hypermethylation. Aim - in present study, we investigated the prevalence of hypermethylation of cas-pase-8 (CASP8), TMS1 and DAPK genes in correlation with clinicopathological factors in childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL). A case-control study has been conducted based on bone marrow and peripheral blood samples from 125 ALL patients and 100 sex-age matched healthy controls. Methylation specific polymerase chain reaction (PCR) and bisulfite sequencing PCR was performed to analyze the methylation status of these genes. Reverse transcription PCR and real time PCR was carried out to determine changes in the mRNA expression level of the genes due to hypermethylation. Hypermethylation of the 5'CpG islands of the CASP8, TMSl and DAPK gene promoters was found in 3,2, 6,4, and 13,6 % of 125 childhood ALL samples from north Indian population, respectively. There were significant differences in pattern of hypermethylation of TMSl (p = 0,045) and DAPK (p << 0,001) between patients and healthy controls. Down-regulation of mRNA expression was found in cases in which CASP8, TMS1 and DAPK were hypermethylated. Conclusions: the present study indicated the impact of hypermethylation-mediated inactivation of CASP8, TMSl and DAPK genes, which is associated with risk of childhood ALL. This abnormality occurs in leukemogenesis and it may be used as a biomarker and for predicting the prognosis of ALL.

In childhood tumors, including retinoblastoma, osteosarcoma, and neuroblastoma, the RB-E2F1 pathway is inactivated, as a rule. These tumors arise from precursor cells that fail to undergo the terminal differentiation. Noteworthy, the RB1-encoded protein (RB) does not control the cell cycle in embryonic stem cells. It has not been yet well understood how RB controls cell sternness and differentiation. The question arises why "inactive" RB is required for the survival and sternness of cells? Recently, we have found that overexpression of the RB-binding protein MRPS18-2 (S18-2) in primary fibroblasts leads to their immortalization, which is accompanied by the induction of embryonic stem cell markers and, eventually, malignant transformation. We suggest that cell sternness may be associated with high expression levels of both proteins, RB and S18-2. There must be a strict regulation of the expression levels of S18-2 and RB during embryogenesis. Disturbances in the expression of these proteins would lead to the abnormalities in development. We think that the S18-2 protein, together with the RB, plays a crucial role in the control on cell sternness and differentiation. We hope to uncover the new mechanisms of the cell fate determination. The SI8-2 may serve as a new target for anticancer medicines, which will help to improve human health.

Hemangiomas are the most common congenital vascular and benign tumor in infants and children. Most hemangiomas do not cause major symptoms to require intervention, however, the larger hemangiomas have tendency to bleed and may require surgical removal. Experimental studies have demonstrated the role of urokinase plasminogen activator (u-PA), especially cell surface u-PA, as an initiator of extra-cellular matrix proteolysis and associated tumor cell invasion. Aim - to examine, whether the antitumor effects of a specific nutrient mixture are due to induction of apoptosis by inhibition of u-PA. A nutrient mixture containing lysine, proline, ascorbic acid, and green tea extract which has showed anticancer activity against a number of cancer cell lines was used as an experimental composition. EOMA cells were grown in appropriate media with antibiotics in 24-well tissue culture plates. At near confluence, the cells were treated with nutrition mixture at 10, 100, 1000 pg/ml in triplicate. Analysis of u-PA activity was carried out by fibrin zymography. Morphological changes and caspase activation associated with apoptosis induction was checked by H&E staining and Live Green caspase assay, respectively. Apoptosis inducing anticancer drug camptothecin (10 mu M) was used as positive control. The nutrition mixture exhibited dose response toxicity with maximum toxicity 55 % (p << 0,001) at 1000 mu g/ml. EOMA cells expressed u-PA, which was inhibited by nutrition mixture in a dose-dependent manner. The caspase analysis revealed a dose dependent increase in apoptosis of EOMA hemangioma cells, with an increasing apoptosis observed at 100 mu g/ml, and maximum at 1000 mu g/ml. Cells treated with nutrition mixture showed significantly more apoptotic changes than the control or camptothecin-treated cells. Conclusion: these results suggest that NM may induce apoptosis of hemangioma cells in vitro thus warranting further investigation.

Aim - the objective of this study was to investigate expression of drug resistance associated genes in CD34⁺ and CD34^- leukemic subpopulations in childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL). ALL samples with heterogeneous CD34 expression were separated into CD34-positive and CD34-negative subpopulations and mRNA levels of MDR1, LRP, BCRP and BCL-2 genes were compared. BCL-2 gene expression levels did not differ significantly between CD34⁺ vs CD34^- subpopulations in most analyzed ALL cases. Oppositely, MDR1 gene had >> two-fold differences in expression levels between subpopulations in the majority of ALL cases. In T-lineage ALL CD34^- fractions had increased level of BCRP and LRP genes in comparison with CD34⁺ ones whereas in most of B-lineage ALL expression of these genes did not differ. Conclusion: it was not found the unique pattern of resistance related genes expression in CD34⁺ vs CD34^- subpopulations. However, in majority of studied pediatric ALL cases with CD34 heterogeneous expression one of subpopulations (positive or negative) could have an advantage for survival through elevated expression of drug resistance related genes.

Індекс рубрикатора НБУВ: Р733.411.022 + Р733.569.41

Рубрики:

Лейкози (лейкемії) у дітей

Пухлини системи кровотворення, крові і ретикулоендотеліальної системи у дітей

Шифр НБУВ: Ж14976 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Background: as a rare tumor, yolk sac tumor is a type of neoplasm that appears like the yolk sac, extraembryonic mesenchyme, and allantois. The mediastinum is the second most frequent area after the gonadal area. Case report: We present an extremely rare case of 15 years old boy with mediastinal yolk sac tumor. The boy came with the chief complaint of swelling of the neck and face. Computed tomography scan of the chest revealed bulky mass with a cystic component that infiltrated the heart. The diagnosis of mediastinal yolk sac tumor was made after core needle biopsy. Histopathologic analysis revealed tumor mass with solid and microcystic structure and pleomorphic nucleus within the tumor cells. Laboratory finding showed elevated serum alpha-fetoprotein level reaching more than 8000 ng/ml. Echocardiography revealed a mass in the right atrium. The patient condition was rapidly deteriorated due to his vena cava superior syndrome. Unfortunately, the patient died two days after diagnosis and we did not have the chance to do the therapy. Conclusion: mediastinal yolk sac tumor is a rare malignancy that requires comprehensive management. The diagnosis should be made based on histopathological findings with the addition of thoracic computer tomography scan to assess the degree of infiltration to surrounding organ. A life-threatening condition such as vena cava superior syndrome should be assessed promptly to allow for immediate treatment.

Отмечено, что 66 детей, больных с дифференцированным раком щитовидной железы, проходили лечение радиойодом после тиреоидэктомии. Лечебные активности составили от 370 до 5 600 МБк. Больные разделены на три группы согласно данным сцинтиграфии: с остаточной тканью щитовидной железы (25 - І группа), с метастазами в лимфатических узлах (15 - ІІ группа), с метастатическими поражениями легких (26 - ІІІ группа). Цель работы - определить, как величина активности влияет на количество курсов радиойодтерапии, необходимых для полной абляции остаточной ткани щитовидной железы и всех очагов метастазирования. В конкретном интервале терапевтической активности определено относительное количество больных, у которых была достигнута полная абляция после первого курса лечения (f). Проанализирована зависимость f от значений терапевтической активности. В группах с метастатическими поражениями в лимфатических узлах и легких оценена зависимость количества курсов до полной абляции тиреоидной ткани как функция величины активности. В І группе f фактически принимает постоянное значение 0,55 в диапазоне активности от 400 до 2 500 МБк, затем f возрастает до 1 и не меняется при дальнейшем повышении активности. После проведения нелинейного регрессионного анализа установлено, что в ІІІ группе чем выше первая терапевтическая активность, тем меньшее количество курсов необходимо до полной абляции. Таким образом, величину активности 2 500 МБк можно считать оптимальным значением для абляции остаточной ткани щитовидной железы при отсутствии метастатических поражений. При наличии метастатических поражений в лимфатических

узлах и легких величина активности при первом курсе радиойодтерапии с целью минимизации количества курсов должна быть не менее 4 000 МБк.

Background: acute lymphoblastic leukemia (ALL) is the most worldwide common type of childhood cancer. Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) and 5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase (MTR) participate in folate pathways and are known as critical factors for DNA integrity as well as DNA hypomethylation. The aim of this work is to investigate frequency of MTHFR (677C -> T and 1298A -> C) and MTR (2756A -> G) polymorphisms and their interaction with respect to possible effect on risk of childhood ALL among North Indian population. Procedure: A case control study from has been conducted on bone marrow and peripheral blood samples from 125 ALL patients and 100 sex-age matched healthy controls using PCR-RFLP method. No statistically significant differences were observed for different genotypes between patients and controls (p >> 0,05). Significant difference for the risk of ALL in individuals having genotype of MTHFR 677TT (OR = 0,61, 95 % CI = 0,21 - 1,77) and MTHFR 1298CC (OR = 0,56, 95 % CI = 0,18 - 1,68) was not observed. The correlation of SNP of MTR gene and risk of ALL was not observed, too. Conclusions: the differences in distribution of possible combined genotypes of MTHFR (677C -> T, 1298A -> C) and MTR (2756A -> G) between ALL patients and controls were statistically insignificant.

Aim - to investigate the association of MDM2 expression at the mRNA levels in neuroblastoma with clinical features and unfavorable disease factors to determine the possibility of it usage as a prognostic marker of neuroblastoma. Total RNA and DNA were extracted from tumor tissue samples of total 91 neuroblastoma patients (mean age: 39,45 +- 4,81 months). MDM2 mRNA levels were detected with Q-PCR. TP53 gene deletion was detected with FISH method. MYCN amplification was detected with Q-PCR analysis in fresh tumor samples and FISH in FFPE samples. We investigated the association of MDM2 mRNA expression with clinical outcome in neuroblastoma patients (n = 91). Kaplan - Meier curves showed a significant association of high MDM2 expression with poor event-free survival (p << 0,001). Clinical outcome of patients without MYCN amplification with low MDM2 expression was associated with better event-free survival than with high MDM2 expression (p << 0,001). Overexpression of MDM2 can be used as significant prognostic marker for patient stratification on risk groups and treatment optimization. Conclusion: our results showed that the high expression of MDM2 at mRNA levels is an important factor of neuroblastoma prognosis. It may be a valuable additional molecular marker in guiding specific therapy in MYCNnon-araplified NB patients without TP53 gene deletion.

Проведено определение длины теломер, уровня теломеразной активности, характера экспрессии белковой субъединицы hTERT и РНК-компонента hTR теломеразы у детей с острым лимфобластным лейкозом. Установлено, что уровень теломеразной активности значительно выше при острых лимфобластных лейкозах в первый острый период и рецидивах по сравнению с пациентами в стадии ремиссии и здоровыми людьми. Отмечена обратная корреляция уровня теломеразной активности с длиной теломер в нормальных и опухолевых клетках. Теломеразная активность может регулироваться как на уровне экспрессии каталитической субъединицы теломеразы hTERT, так и на уровне альтернативного сплайсинга транскриптов этого гена. Выявлены различия в соотношении вариантов транскриптов мРНК hTERT у больных в первый острый период и в стадии ремиссии. Сделано заключение о том, что определение длины теломер, уровня теломеразной активности и экспрессии hTERT и вариантов его транскриптов может служить характеристикой опухолевого клона у детей с острым лимфобластным лейкозом.

Оценен вклад наследственной предрасположенности к тромбозу в формировании венозной тромбоэмболии у пациентов онкологического профиля детского возраста. Методы: ПЦР с последующим рестрикционным анализом. Показано достоверное повышение частоты встречаемости мутации Лейдена в группе больных с тромбозами по сравнению с контрольной группой. Мутация гена протромбина G20210A не выявлена в ходе исследования ни у одного из 99 обследованных пациентов, что свидетельствует о низкой частоте встречаемости данной мутации в белорусской популяции. Мутация гена MTHFR С677T выявлена в группе больных и в контрольной с примерно одинаковой частотой (47,4 и 55,0 % соответственно). Сделаны выводы, что такие факторы как тяжесть состояния пациента, коагуляционный статус, объем заместительной гемостатической терапии, наличие симптомов сепсиса, равно как и длительность катетеризации вен, не являются существенными в прогнозировании риска возникновения тромбоза. Показано, что ведущими факторами риска в возникновении тромбоэмболических осложнений у пациентов онкологического профиля детского возраста являются длительная гиподинамия или сочетание длительной гиподинамии и катетеризации бедренной вены, а также наличие мутации Лейдена. Больным онкологического профиля с развившимся венозным тромбозом на фоне лечения основного заболевания необходимо определение мутации Лейдена, так как носительство последней позволяет определить длительность антикоагулянтной терапии и проведение вторичной профилактики.

Aim - to improve the treatment results of patients with locally advanced osteosarcoma with large volume using neoadjuvant chemotherapy (NACT) (ifosfamide at a dose of 18 g/ml) and planning of organ-conserving surgery by evaluating the state of tumor pseudocapsule. A study group included 46 children aged from 7 to 18 years, mean age - 12 years. In 68 % of the patients tumor volume was larger or significantly larger than 200 ml (from 27 to 2400 ml), mean tumor volume was 342 ml. All patients have been examined by X-ray radiography, CT, Doppler ultrasound. Convenient chemotherapy consisted of methotrexate at a dose of 12 g/ml, cisplatin (120 mg/ml) in combination with doxorubicin (75 mg/ml). If such chemotherapy was considered ineffective with the use of an algorithm for determination of chemotherapy efficacy, 2 cycles of chemotherapy with ifosfamide at a dose of 18 g/ml per course have been applied. At the stage of planning of organ-conserving surgery, the state of tumor pseudocapsule was analyzed. In 6 months post-operative chemotherapy was carried out with the use of methotrexate, cisplatin with doxorubicin, ifosfamide at the same doses. Myelotoxicity of ifosfamide treatment at a dose of 18 g/ml is comparable to that of to a course of doxorubicin + cisplatin: the depth of leucopenia was significantly higher (p << 0,05), the duration of agranulocytosis is similar after such therapies. In the study group, 69,6 % patients have reached grade 3 - 4 pathomorphosis. Organ-conserving surgery was performed in 86,9 % of the patients. Local tumor recurrence was registered in 15,2 % patients of the study group. 5-year relapse-free survival was achieved in 62 +- 10 % (p = 0,02), the overall 5-year survival - 76,5 +- 9 % (p = 0,02). Conclusions: introduction of ifosfamide at a dose of 18 g/ml in the treatment scheme of pediatric patients with locally advanced osteosarcoma along with individualization of pre-oper- g/ml in the treatment scheme of pediatric patients with locally advanced osteosarcoma along with individualization of pre-oper- g/ml in the treatment scheme of pediatric patients with locally advanced osteosarcoma along with individualization of pre-oper- ml in the treatment scheme of pediatric patients with locally advanced osteosarcoma along with individualization of pre-oper- in the treatment scheme of pediatric patients with locally advanced osteosarcoma along with individualization of pre-oper- in the treatment scheme of pediatric patients with locally advanced osteosarcoma along with individualization of pre-oper- in the treatment scheme of pediatric patients with locally advanced osteosarcoma along with individualization of pre-oper- osteosarcoma along with individualization of pre-oper along with individualization of pre-operative chemotherapy, pre-oper ative analysis of NACT efficacy and the state of tumor pseudocapsule during planning stage of organconserving surgery significantly improves efficacy of the therapy in patients with large tumor volume.

Целью экспериментальной части исследования являлось изучение влияния уротропина (гексаметилентетрамина) на переносимость сверхжестких режимов общей гипертермии (ОГ) и оценка их противоопухолевого эффекта у крыс. Клинически исследовалась возможность применения и эффективность ОГ в жестком режиме в комбинации с уротропином при лечении детей со злокачественными опухолями поздних стадий. Методы: сверхжесткий режим ОГ (44,5 - 45,0 <$E symbol Р>C, 60 мин) был применен к 30 белым беспородным крысам с привитой саркомой 45. В клинике сеансы ОГ (42,5 - 43,0 <$E symbol Р>C) проводились на установке "Эмона" с помощью электромагнитного излучения (13,56 МГц). В ходе эксперимента уротропин повышал переносимость высоких температур и сделал возможным применение к крысам сверхжестких режимов ОГ с выраженным противоопухолевым эффектом. В клинических условиях комбинация ОГ + уротропин использовалась в многокомпонентном лечении 13-ти детей с различными злокачественными опухолями поздних стадий. Всего проведено 43 сеанса, и при удовлетворительной переносимости лечения полная или частичная регрессия опухолевых очагов отмечена у 69 % больных. Уротропин повышает переносимость жестких режимов ОГ, уменьшая последствия теплового воздействия на организм. Проведение ОГ в более высоком температурном режиме (42,5 - 43,0 <$E symbol Р>C) усиливает повреждение опухоли. Однако ОГ может усилить и апоптотическую гибель лимфоцитов. Лимфоферез перед сеансом ОГ и реинфузия аутолимфоцитарной массы после него может быть одним из новых подходов, уменьшающих негативное влияние лечения на лимфоциты.

Механизмы возникновения стойкости к химиопрепаратам солидных опухолей у детей разнообразны, что обосновывает с прогностической и предикативной целью определение иммуногистохимических маркеров p53, c-erbB-2 (Her2neu), Bcl-2, P-glycoprotein (mdr1), CD34 еще при установлении морфологического диагноза.

Наведено результати вивчення особливостей клініки, імунних і метаболічних показників 110 дітей з кістковими кістами (КК). Відмічено зниження рівня АТФ у крові, активацію процесів пероксидного окиснення ліпідів, зниження активності ферментів антиоксидантного захисту - каталази та СОД, підвищення вмісту в крові "анаеробних" фракцій лактатдегідрогенази ЛДГ4-5, розвиток вторинного імунодефіциту за відносним супресорним варіантом. Відмічено, що порушення імунного та метаболічного гомеостазу більш виражені за аневризмальних КК у порівнянні з солітарними КК і поглиблюються після проведення відкритих кістково-пластичних операцій (КПО). З'ясовано, що застосування в комплексі з більш ощадним хірургічним лікуванням (пункційна КПО) препаратів імунокоригувальної дії за умов їх індивідуальних підборів у тестах in vitro мало сприятливий вплив на клінічне протікання післяопераційного періоду, сприяло прискоренню репаративних процесів у кістковій тканині, нормалізації імунних і метаболічних показників, обумовлювало скорочення частоти післяопераційних ускладнень, поліпшувало віддалені результати оперативного лікування КК.

Проаналізовано результати імунофенотипування бластних клітин кісткового мозку у 76-ти дітей з гострою лімфобластною лейкемією (ГЛЛ). Відповідно до класифікації GALGB та EGIL, діагноз В-лінійної ГЛЛ установлено у 63-х хворих, Т-лінійної - у 13. У 41-му випадку на лейкемічних клітинах виявлено комбінації аберантної (мієлоїдних) та/або асинхронної (Т-клітинних) коекспресії поверхневих маркерів.