Изучены функциональные свойства кооперативных моноклональных антител, совместное применение которых повышает єффективность связывания молекул антигена. На примере 23 полученных моноклональных антител против фактора некроза опухолей (ФНО) человека показано, что генерация кооперативных антител имеет селективное преимущество и большинство из анти-ФНО моноклональных антител принадлежат по специфичности к двум кооперативным эпитопам А1 и С1. По функциональным свойствам кооперативные моноклональные антитела представляют два типа нейтрализующих антител. C1 моноклональные антитела являются нейтрализующими антителами конкурентного типа, блокирующий эффект которых проявляется вследствие прямого экранирования рецепторсвязывающего участка ФНО. А1 моноклональные антитела являются нейтрализующими антителами аллостерического типа, которые блокируют активность ФНО путем изменения его биологически активной конформации. Совместное применение А1 и С1 моноклональных антител обеспечивает синергичную нейтрализацию ФНО посредством комплементарного сочетания конкурентной и аллостерической нейтрализации. Кооперативность антител может отражать их естественную адаптацию к наиболее эффективной нейтрализации белковых антигенов.

Аргументировано, что при лечении 30-ти больных псориазом с применением комплекса n-3 ПНЖК, витаминов <$Eroman D sub 3> и A наблюдали повышение сниженного уровня наивных T-хелперов, особенно несущих молекулу клеточной адгезии РЕСАМ-1, и T-хелперов, ответственных за нормальную миграцию T-лимфоцитов. Снижался уровень T-лимфоцитов, для которых характерна продукция интерферона-гамма и повышался уровень B1a-лимфоцитов, что свидетельствовало об ослаблении Th1 иммунного ответа при уменьшении выраженности клинических проявлений псориаза. Одновременное применение у 30-ти других больных псориазом комплекса n-3 ПНЖК, витаминов <$E roman D sub 3> и A с УФО способствовало снижению уровня T-лимфоцитов эффекторов и активированных цитотоксичных T-лимфоцитов. В пользу уменьшения влияния Th1 и повышения Th2 ответа свидетельствует повышение уровня антителопродуцирующих B1a-лимфоцитов. Улучшение клинического состояния отмечено у всех пациентов первой группы, кроме одного.

В экперименте in vitro изучено влияние прогестерона и <$E17~beta>-эстрадиола на костимулирующий пролиферацию лимфоцитов эффект провоспалительных цитокинов: фактора некроза опухолей (ФНО), ИЛ-1 <$E alpha> и <$E beta>. Оба гормона ингибируют пролиферацию лимфоцитов, стимулированную антиCD3 антителами. При этом прогестерон оказывает более сильное влияние, чем <$E 17~beta>-эстрадиол (64 % и 13 % ингибиции). Провоспалительные цитокины усиливают пролиферацию лимфоцитов в ответ на антиCD3 антитела: ФНО - на 24 %, ИЛ-1 <$Ealpha> - на 16 %, ИЛ-1 <$E beta> - на 19 %. В присутствии провоспалительных цитокинов <$E17~beta>-эстрадиол усиливает костимуляцию пролиферации под влиянием ФНО. Прогестерон полностью нейтрализует костимулирующую активность даного цитокина и вызывает обратный эффект - усиление ингибиции пролиферации лимфоцитов под действием ФНО. Прогестерон и <$E17~beta>-эстрадиол частично ингибируют костимулирующую пролиферативную активность ИЛ-1 <$Ealpha> и <$Ebeta>. Установлено, что прогестерон и <$E17~beta>-эстрадиол ингибируют пролиферацию лимфоцитов, в частности подавляя костимулирующий эффект провоспалительных цитокинов ИЛ-1 <$E alpha> и <$E beta>. Однако, при влиянии на костимулирующую активность ФНО женские стероидные гормоны проявляют антагонизм действия.

Изучено влияние женских стероидных гормонов на экспрессию молекул адгезии лейкоцитами (лимфоцитами, моноцитами, гранулоцитами) периферической крови. Показано, что под влиянием прогестерона происходила ингибиция нестимулированной экспрессии CD54 на моноцитах и гранулоцитах благодаря снижению плотности молекул адгезии на поверхности клеток. 17<$E beta>-эстрадиол ингибировал нестимулированную экспрессию CD54 на моноцитах и CD69 на моноцитах и лимфоцитах также за счет уменьшения плотности этих молекул на клетках. Прогестерон ингибировал фактор некроза опухолей (ФНО) - стимулированную экспрессию CD54 и CD11b на гранулоцитах и CD69 на лимфоцитах за счет снижения плотности этих молекул на поверхности клеток, и таким образом, частично блокировал провоспалительную активность цитокина. Прогестерон также снижал экспрессию CD62L на гранулоцитах за счет уменьшения количества позитивных по этому маркеру клеток, при этом усиливая действие ФНО. Полученные результаты свидетельствуют об участии женских стероидных гормонов в регуляции экспрессии молекул адгезии лейкоцитами периферической крови, в циркуляции и активации лейкоцитов.

Определен уровень фактора некроза опухоли-<$E alpha> (TNF-<$E alpha> и его растворимых рецепторов (TNF-R55, TNF-R75) у 16-ти больных псориазом мужчин до и после лечения с применением комплекса n-3 полиненасыщенных жирных кислот, витаминов <$E roman D sub 3> и A. После лечения отмечено достоверное снижение индекса площади и тяжести псориаза (PASI). Средний уровень TNF-<$E alpha> был в пределах нормы, а уровень его растворимых рецепторов - повышен до и после лечения. До лечения установлена корреляция между PASI и TNF-R55, которая исчезала после лечения. TNF-<$E alpha> до лечения коррелировал только с TNF-R55, а после лечения и с TNF-R75. Корреляция между уровнями обоих рецепторов отмечена как до, так и после лечения. Полученные данные свидетельствуют о функциональном значении обоих рецепторов и всей системы в целом, а TNF-R55 может быть использован как диагностический критерий активности патологического процесса при псориазе.

Вивчено функціональні та імунохімічні властивості моноклональних антитіл (мкАт), які мають взаємопідсилювальне або коопераційне зв'язування молекул антигену. На прикладі отриманих 23 мкАт проти фактора некрозу пухлин (ФНП) встановлено, що генерація кооперційних мкАт має селективну перевагу і більшість з анти-ФНП мкАт належать за специфічністю до двох коопераційних епітопів Al і Cl. За функціональними властивостями коопераційні анти-ФНП мкАт складають два типи нейтралізуючих мкАт. Cl мкАт є нейтралізуючими антитілами конкурентного типу, ефект яких проявляється внаслідок екранування рецептор-зв'язної ділянки ФНП, а Al складають мкАт алостеричного типу, які викликають нейтралізацію ФНП зміною його біологічної активної конформації. Спільне використання Al і Cl мкАт забезпечує синергічну нейтралізацію ФНП та її ефективне зв'язування (ФНП входить до складу комплексів з розчинними ФНП рецепторами). Ці властивості дозволили розробити на основі Al і Cl мкАт максимально ефективні методи детекції та нейтралізації ФНП. Використання антитіл зі складу головної коопераційної пари забезпечує однотипність зв'язування антигенів, що може бути використано для вирішення актуального питання стандартизації тест-систем щодо визначення цитокінів.

Розроблено метод коопераційного імуноферментного аналізу (ІФА) для визначення фактора некрозу пухлин (ФНП) людини на основі одержаних проти ФНП коопераційних моноклональних антитіл (мкАт). Встановлено, що коопераційні мкАт забезпечують ефективне зв'язування ФНП зі складу комплексів із розчинними ФНП-рецепторами, що має принципове значення для оцінки функціонального пулу ФНП у зразках ex vivo методом ІФА. Однотипність зв'язування ФНП певною парою коопераційних мкАт надає зручний спосіб стандартизації ІФА-систем для оцінки ФНП і, можливо, інших цитокінів шляхом визначення мкАт, що складають головну коопераційну пару, та відбору для постановки ІФА найбільш високоафінних із них. Розроблений ІФА відрізняється високою чутливістю (2 пг/мл) та меншою тривалістю аналізу за рахунок одночасної інкубації зразків з парою коопераційних мкАт протягом 1 години. Решта аналітичних характеристик є типовими для ІФА неконкурентного типу. Випробування коопераційного ІФА для визначення ФНП у сироватці крові хворих з системними формами запалення довели його придатність до використання у клінічних дослідженнях.