Наведено експериментальні та клінічні результати вивчення ефективності та токсичності вітчизняного препарату "Мебіфон" ВАТ "Фармак" у порівнянні з іншими широко вживаними бісфосфонатами. Результати аналізу визначили місце препарату "Мебіфон" як препарату для покращання якості життя хворих онкологічного профілю з метастазами у кістках.

Определены уровни антител против рекомбинантных аналогов антигенов Mycobacterium bovis rMPB63 и rMPB83, а также против деривата туберкулина PPD в 94 образцах сывороток крови крупного рогатого скота. Предложена схема статистического анализа распределений уровня антител к исследованным антигенам с помощью аппроксимации совокупностью кривых Гаусса по алгоритму Левенберга - Маркуардта. Полученные результаты указывают на возможность использования наряду с традиционным антигеном PPD рекомбинантных антигенов MPB63 и MPB83 для создания тест-систем, применимых при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота на уровне стад.

Описаны строение и свойства фибриногена, (про)тромбина, фактора ХІІІ(а), плазмин(оген)а, тканевого активатора и ?2-антиплазмина; образование растворимого и твердофазного фибрина, а также процесс разрушения фибринового сгустка. Расширена информация о взаимодействии этих белков с клеточными рецепторами.

Исследовано влияние твина 20, а также лизоцима и протамина на способность полиреактивных иммуноглобулинов (ПРИГ) связываться с различными антигенами. Тогда как твин 20 ингибирует реакцию связывания ПРИГ с антигенами, сорбированными на иммунологических плашках, лизоцим и протамин, наоборот, усиливают ее. Поскольку смесь протамина и лизоцима в оптимальных для стимуляции реакции ПРИГ-антиген не усиливает эффект, сделан вывод, что механизм воздействия этих протеинов на реактивность ПРИГ является однотипным. Особый интерес, по мнению авторов, вызывает то, что твин 20 в присутствии лизоцима или протамина не ослабляет действие этих протеинов на реактивность ПРИГ по отношению к сорбированным на плашке антигенам, а, наоборот, усиливает этот эффект.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е60*732.221*74*871

Рубрики:

Загальна зоологія

Шифр НБУВ: Ж22412/а Пошук видання у каталогах НБУВ 

An immune sensor for the express analysis of fibrinogen in human blood plasma based on the surface plasmon resonance effect is described. As a detection mean, monoclonal antibodies against a human D-dimer cross-reacting with fibrinogen are generated and used. Antibodies were immobilized directly on the gold film surface of a sensitive sensor element. The method is proved to be fast, reliable, and sensitive in the range of 0,6 - 15,0 g/l, covering the concentration range of fibrinogen at various pathologies.

Two monoclonal antibodies against a D-dimer fragment of fibrin and their Fab-fragments proved to be very specific inhibitors of fibrin polymerization. Electron microscopy showed that these mAbs and their Fab-fragments added into the polymerization medium at the equimolar ratio to fibrin stopped the process of polymerization at the level of monomeric molecules. Epitopes for the mAbs studied were localized at the N-terminal half of the <$Ebeta>-chain of a D-domain of fibrin. We suggest that the previously unknown fibrin polymerization site is situated in this region of a fibrin molecule.

Показано, що у випадку цукрового діабету 1 і 2 типу підвищується вміст розчинного фібрину та D-димеру в плазмі крові - найважливіших молекулярних маркерів активації системи зсідання крові. Збільшення концентрації цих маркерів позитивно корелює зі ступенем тяжкості судинних ускладнень у хворих із цією патологією. В групі хворих із початковими функціональними судинними ускладненнями виявлено достовірне збільшення розчинного фібрину в 5,5 разів, а D-димеру - в 2,1 разу в порівнянні з контрольною групою здорових донорів. У групі хворих із ускладненнями середньої тяжкості розчинний фібрин збільшувався в 12,5 разів, а D-димер - в 3,0 рази. У групі з важкими ускладненнями розчинний фібрин був збільшений у 43,2 рази, а D-димер - в 6,6 разів. Таким чином, кількісний вміст розчинного фібрину та D-димеру в плазмі крові є важливим діагностичним показником судинних ускладнень у разі цукрового діабету.

У дослідах in vitro на тимоцитах досліджено вплив формальдегіду, його можливих донорів (тіопроліну, форміату, уротропіну) та акцептора формальдегіду - димедону на індуковану азидотимідином загибель клітин. Показано, що за умов токсичної дії азидотимідину на тимоцити формальдегід і тіопролін (меншою мірою форміат та уротропін) за малих нетоксичних для клітин концентрацій проявляють істотну цитопротекторну дію, що знімається димедоном.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е60*732.242*723-642:Г245.111

Рубрики:

Загальна зоологія

Шифр НБУВ: Ж22412/а Пошук видання у каталогах НБУВ 
Повний текст  Наукова періодика України 

Наведено нові дані щодо певних біологічних властивостей поліреактивних імуноглобулінів (ПРІГ). Розглянуто їх можливість зв'язувати перший фактор системи комплементу. Показано, що трансформація сироваткових імуноглобулінів у ПРІГ не призводить до вірогідної зміни спорідненості цих імуноглобулінів до комплементу. Це свідчить про те, що конформація тієї частини Fc області ПРІГ, яка відповідає за взаємодію з першим компонентом комплементу, мало відрізняється від конформації інтактних імуноглобулінів. Внутрішньовенна ін'єкція ПРІГ мишам у суміші з еритроцитами барана або з інактивованими клітинами стафілокока не впливає на рівень імунної відповіді до цих антигенів. Водночас ін'єкція ПРІГ разом з очищеним дериватом туберкуліну призводить до десятиразового підсилення антитілоутворення до такого антигену. Ці дані свідчать про імуномодулювальні властивості ПРІГ до низькоімуногенних антигенів.

Розроблено імуноферментний метод кількісного визначення D-димеру фібрину у плазмі крові людини на основі моноклональних антитіл III-3b і II-4d. Метод апробовано під час визначення концентрації D-димеру у плазмі крові хворих на ішемічну хворобу серця (ІХС) зі стенокардією та без неї, а також на гіпертонічну хворобу (ГХ). Зроблено висновок, що за розвитку ІХС зі стенокардією та без неї, а також ГХ вміст D-димеру звичайно не перевищує верхню межу норми - 500 нг/мл (у 64, 76 і 95 % випадків відповідно). Після напівкількісного визначення вмісту розчинного фібрину у плазмі крові хворих на ІХС і ГХ показано, що за таких патологій виявляються значні коливання рівня розчинного фібрину: від <$E <<~0,03> до 0,15 мг/мл, але не спостерігається кореляція між вмістом D-димеру та розчинного фібрину. За допомогою електрофорезу в поліакриламідному гелі з додецилсульфатом натрію у складі розчинного фібрину виявлено лише продукти з молекулярною масою, яка відповідає фібрин(оген)у. Дійшли висновку, що у разі розвитку зазначених патологій у складі розчинного фібрину визначаються лише олігомери фібрину (можливо з включенням фібриногену), які не стабілізовані ковалентно фактором XIIIa.

Отмечено, что технология фагового дисплея является эффективным методом получения иммунологических реагентов нового поколения. Наивная мышиная фаговая библиотека рекомбинантных одноцепочечных вариабельных фрагментов антител (scFv - single chain variable fragments) использована для получения scFv против дифтерийного токсина - главного фактора патогенности и важного диагностического антигена возбудителя дифтерии. Отобран клон, синтезировавший scFv к субъединице B дифтерийного токсина с константой аффинности <$E 1,13~cdot~10 sup 7~roman М sup -1>. Полученные scFv сохраняли активность по крайней мере в течение восьми месяцев хранения.

Разработан иммуноферментный метод (ИФМ) количественного определения растворимого фибрина (РФ), который основан на использовании полученных фибринспецифических моноклональных антител (монАТ). Эпитоп для этих антител расположен во фрагменте B<$E beta>118-134 фибрина. Данный метод апробирован на плазме крови (ПК) здоровых беременных женщин (ЗБЖ) (контрольная группа) и женщин с угрозой прерывания беременности (УПБ). Средние значения концентраций РФ были достоверно большими у женщин с УПБ по сравнению с контрольной группой в период с 4-й по 24-ю неделю (<$E 17,87~symbol С~3,15> мкг/мл и <$E 9,03~symbol С~1,58> мкг/мл соответственно, <$E р~<<~0,05>). Выявлена слабая негативная корреляция между концентрацией РФ со сроком беременности у женщин с УПБ (r = -0,201; n = 35), в то же время корреляция между этими показателями у ЗБЖ не наблюдалась (r = 0,004; n = 28). Средние значения концентраций РФ, определенные с помощью полуколичественного метода высаливания РФ из плазмы крови фосфатами, были также большими при беременности с угрозой ее прерывания по сравнению с ЗБЖ. Абсолютные значения концентраций РФ, определенные методом высаливания, были существенно выше по сравнению с результатами, полученными при использовании ИФМ. Иммуноблотанализ с использованием монАТ 2d-2a, эпитоп для которых включает пептидную связь В<$E beta>14-15, показал, что основным компонентом РФ, который высаливается из ПК ЗБЖ и беременных с УПБ, является олигомерный фибрин дезАА (с возможным включением фибриногена и/или фибрина дезА), не стабилизированный фактором XIIIa.

Концентрации D-димера в исследуемых образцах ПК, определенные с помощью ИФМ, варьировали от 1 до 224 нг/мл в период беременности с 4-й по 37-ю неделю. Найдена положительная корреляция между концентрацией D-димера и сроком беременности как в норме, так и при УПБ (r = 0,765; n = 33 и r = 0,712; n = 44 соответственно), однако средние значения концентраций D-димера в разные периоды беременности достоверно не отличались в обеих исследованных группах. Таким образом, из двух очень важных молекулярных маркеров состояния системы свертывания крови - РФ и D-димера - именно количественное определение концентрации РФ в ПК является полезным для диагностики при УПБ.

Індекс рубрикатора НБУВ: Р716.11 + Р716.2-2

Рубрики:

Вагітність

Патологічне акушерство

Шифр НБУВ: Ж21341/а Пошук видання у каталогах НБУВ 
Повний текст  Наукова періодика України 

Показано, что применение традиционного метода определения аффинности антител может привести к получению неточных результатов и далеко неполной информации об обследуемом образце антител, особенно если данный образец содержит два и более видов антител различной аффинности. Для решения подобной проблемы предложено использовать иной подход, который позволяет определить, что исследуемый образец содержит более одного типа антител разной аффинности. В случае обнаружения в исследуемом образце двух типов антител различной аффинности для их характеристики следует применять метод, разработанный ранее.

Проведены теоретические исследования зависимости точности экспериментального определения аффинности взаимодействия антител с антигеном от степени достижения динамического равновесия. Показано, что измерение концентрации реагентов в момент, когда равновесие рассматриваемой реакции еще не достигнуто, приводит к снижению точности оценки аффинности реакции. Установлено, что для большинства антител, в смеси с соответствующим антигеном, динамическое равновесие в реакции антиген - антитело наступает через 2 - 4 часа после начала реакции.

Наличие в сыворотках животных полиреактивных иммуноглобулинов может заметно повлиять на точность определения константы равновесия реакции взаимодействия специфичных антител и соответствующего антигена. Двумя способами найдены реальные величины аффинности антител в сыворотке. Заблокированы полиреактивные иммуноглобулины высокой концентрацией твина 20 и высокой концентрацией какого-либо антигена, не взаимодействующего с исследуемыми антителами, а затем определена аффинность антител традиционным методом. Второй путь решения данной проблемы - применение для оценки аффинности сывороточных антител разработанного метода, который позволяет оценить аффинность взаимодействия высоко- и низкоаффинных антител, а также соотношение их концентраций в исследуемом образце.

Рассмотрены особенности моно- и двухвалентного взаимодействия рецепторов (или антител) с поливалентным лигандом (или антигеном). Показано, что жесткое соединение сайтов связывания рецептора приводит к значительному возрастанию аффинности связывания с соответствующим лигандом, но только в случае, если его эпитопы полностью комплементарны обоим сайтам связывания рецептора. В противном случае никакого выигрыша от двухвалентного связывания не происходит. Если сайты связывания рецептора соединены гибким линкером, то независимо от расположения эпитопов лиганда происходит успешное связывание рецептора и лиганда. Именно этот подход использует Природа в большинстве случаев при конструировании поливалентных рецепторов, которые обычно соединяются между собой гибким линкером.

Рассмотрены некоторые проблемы, встречающиеся при определении авидности двухвалентных антител в эксперименте или же с помощью теоретических подходов для случаев, когда аффинность антител является известной. Показано, что для определения части двухвалентных антител, остающихся свободными в их смеси с избытком антигена, что требуются для оценки авидности, нужны методы, чувствительность которых заметно превосходит чувствительность ELISA. Ранее существовавшие теоретические подходы не позволяли оценить авидность двухвалентных антител по целому ряду причин. Однако в последние годы предложены методы, которые дают возможность оценить авидность антител или иных рецепторов, состоящих из двух связывающих центров, соединенных гибким линкером известной длины. Таким образом, в настоящее время имеется возможность для определения авидности двухвалентных антител как в эксперименте, так и с помощью теоретических методов.

Рассмотрены некоторые теоретические вопросы анализа аффинности двухвалентных рецепторов (ДВР) (или антител) с помощью метода поверхностного плазмонного резонанса. Показано, что наличие лиганда в растворе, не содержащем рецептор, на этапе, когда происходит диссоциация ранее связавшегося рецептора с иммобилизованным лигандом, приводит к повышению точности определения аффинности взаимодействия. Установлено, что для определения констант скорости реакции связывания рецептора с иммобилизованным лигандом достаточно проанализировать кривую связывания исследуемых реагентов, тогда как анализ кривой диссоциации рецептора, ранее связавшегося с иммобилизованным лигандом, не является необходимым. Предложен новый подход для определения аффинности ДВР (или антител), которые находятся в исследуемом образце жидкости, а соответствующий лиганд (или антиген) является иммобилизованным на чипе прибора-анализатора.

Дифтерийный токсин - это экзоантиген Corynebacterium diphtheriae, ингибирующий синтез протеина и убивающий чувствительные клетки. Цель работы - получение одноцепочечных вариабельных фрагментов антител человека (scFv - single-chain variable fragments) против рецепторсвязывающей B-субъединицы дифтерийного токсина. После 3-х раундов селекции фаговой наивной (неиммунной) библиотеки против рекомбинантной B-субъединицы были отобраны 12 специфичных клонов. Нуклеотидные последовательности отобранных антител были гидролизированы эндонуклеазой Mva I, при этом выявлено 6 уникальных рестриктных паттернов. Одноцепочечные антитела были экспрессированы в клетках Escherichia coli XL1-blue и по методу иммуноблотинга определены в бактериальных экстрактах детекцией антителами к Е-тегу. С помощью методом иммуноэнзимного анализа продемонстрирована способность антител связываться с B-субъединицей токсина, при этом константа аффинности для разных клонов составляла от 10<^>6 до 10<^>8 М<^>-1. Поскольку полученные фрагменты антител специфичны к рецепторсвязывающей B-субъединице дифтерийного токсина, целесообразно дальнейшее исследование их токсиннейтрализующих свойств и терапевтического потенциала. Кроме того, полученные scFv-антитела могут быть использованы для детекции и исследования биологических свойств дифтерийного токсина.