Індекс рубрикатора НБУВ: Р411.022.2

Рубрики:

Мієлоїдні лейкози

Шифр НБУВ: Ж21341/а Пошук видання у каталогах НБУВ 

Відпрацьовано метод візуалізації фагосом за допомогою флуоресцентно мічених бактерій для перевірки колокалізації РН домена білка Bcr-Ab1 з мембраною фагосом. Вивчення колокалізації РН домену з органелами клітин є важливим для розуміння ролі цього домену у клітинних процесах, що потенційно можна використовувати для розробки нових цільових лікарських агентів. Трансфекцію культури клітин мишачих макрофагів J774 проведено з використанням ДЕАЕ-декстарну генетичною конструкцією pEGFP-СЗ-РН, з якої буде синтезуватись білок РН-GFP. Цей білок за рахунок вставки GFP (зелений флуоресцентний білок) надає зелене забавлення за флуоресцентної мікроскопії, що надасть змогу виявити колокалізацію РН домену з органелами клітини.

Зазначено, що білок Bcr-Abl є одним з маркерів пухлинної трансформації, що вивчається вже багато років. Незважаючи на це, перед вченими ще стоїть ряд запитань, на які не знайдені відповіді. При чому вплив частини Bcr на роль гібридного білка в пухлинній трансформації практично не вивчали. Різниця у клінічній картині хворих із різними формами гібридного білка вказують на важливу роль ділянок, що відрізняють між собою ці форми. Основною відмінністю форми p230 Bcr-Abl від інших є наявність у її складі C2 домену білка Bcr, тому дослідження зосереджено на вивченні структури цього домену. Проведено експерименти по клонуванню та експресії білка C2 домену білка Bcr. Розроблено ефективну методику очищення та ренатурації рекомбінантного білка C2 домену білка Bcr в системі експресії pET-28с/E. coli BL21(DE3), що може бути використаний у подальших структурно-функціональних дослідженнях його ролі у патогенезі хронічної мієлоїдної лейкемії. Результати роботи можуть стати основою для розробки нових специфічних агентів, як і нових підходів до блокування сигнальних шляхів, у яких бере участь гібридний білок Bcr-Abl.

Зазначено, що білок Dbl і домени DH (Dbl homology) є важливими регуляторами GTP-аз родини Rho, які полегшують вивільнення GDP із комплексу з GTP-азою. Відомо близько 70 білків, що містять домени DH, які досить часто знаходяться в тандемі з доменами PH (pleckstrin homology). Серед них білок Bcr, який є партнером Abl у реципрокній транслокації t(9;22), що призводить до утворення філадельфійської хромосоми. Клоновано ділянки DH і PH гена bcr у вектор для експресії у клітинах еукаріотів. Перевірено GEF-активність домену DH окремо і разом із доменом PH. Показано, що in vivo домен DH білка Bcr не має GEF-активності щодо підкласів RhoA, Cdc42 і Rac1 GTP-аз родини Rho.

Мультифункціональний магнітно-люмінесцентний нанокомпозит CoFe2O4@SiO2@Gd2O3:Eu2O3 синтезовано копреципітацією солей європію (III) і гадолінію (III) на магнітному ядрі з подальшою термальною декомпозицією. Структуру, фазу та люмінесцентні властивості досліджено за допомогою трансмісійної електронної мікроскопії (ТЕМ), рентгенофазового аналізу та фотолюмінесцентної спектроскопії. Проведено тестування впливу композита на життєздатність макрофагів J774 і його поглинання цими клітинами шляхом фарбування трипановим синім та акридином помаранчевим відповідно. Згідно з результатами ТЕМ, композитні наночастинки круглої форми з середнім діаметром 200 нм. Спостерігаються інтенсивні червоні фотолюмінесцентні смуги, характерні для іонів Eu<^>3+. Оксид гадолінію - обов'язковий компонент для запобігання згасанню люмінесценції Eu<^>3+. Завдяки люмінесцентним і феромагнітним властивостям, високому рівню виживання та фагоцитарному індексу такі нанокомпозити є привабливими для тераностики, зокрема діагностики та лікування раку за допомогою локальної гіпертермії, а також для цільової доставки ліків.

Зазначено, що протеїн Ku - мультифункціональний гетеродимер евкаріотів, що містить дві субодиниці: Ku70 і Ku80. Він задіяний в регуляції багатьох клітинних процесів: негомологічній репарації, V(D)J-рекомбінації генів імуноглобулінів і генів T-клітинного рецептора, регуляції транскрипції та реплікації ДНК. На сьогодні встановлено також зв'язок Ku-протеїну із процесами, задіяними у трансформації нормальних клітин на пухлині, зокрема у випадках Ph-позитивної лейкемії та множинної мієломи. Однак механізми їх і досі не розкриті та потребують подальших досліджень.

Індекс рубрикатора НБУВ: Р411.022-4 + Р569.41-4

Рубрики:

Лейкози(лейкемії)

Пухлини системи кровотворення, крові і ретикулоендотеліальної системи

Шифр НБУВ: Ж21341/а Пошук видання у каталогах НБУВ 

Досліджено вплив наночастинок CoFe2O4 на проліферацію культури мишачих макрофагів J774 і оцінено можливість використання гіалуронової кислоти як ліганду для цільової терапії. Одержано деякі характеристики наночастинок, такі як значення токсичних концентрацій, здатність індукувати оксидативний вибух тощо. Оцінено вплив наноконструкції CoFe2O4 - метотрексат - гіалуронова кислота на проліферативну активність культури остеосаркоми людини MG-63.

V617F mutation of jak2 gene is an important diagnostic criterion for chronic myeloproliferative disorders. The test-system for detection of the mutation by using the method of reverse transcription polymerase chain reaction and direct sequencing of PCR products was proposed.

Проведено оцінку молекулярно-генетичного поліморфізму особин ослиного пінгвіна - дженту (Pygoscelis papua) за маркерами RAPD та визначено максимальну (приблизно 9000 п.н.) і середню довжину теломер особин пінгвінів даного виду приблизно <$E 6300~symbol С~1256> п.н. для дорослих особин та <$E 8100~symbol С~828,4> п.н. для пташенят.

Зазначено, що філадельфійська хромосома - головний маркер розвитку пухлини для більшості пацієнтів з хронічною мієлопроліферативною лейкемією та для значної кількості хворих на гострий лімфобластний лейкоз. Вона обумовлена реципрокною транслокацією між 9-ою та 22-ою хромосомами. На молекулярному рівні утворення хромосоми супроводжується утворенням гібридного bcr/abl-гена. Наведено відомості щодо розробки вітчизняної тест-системи для детекції гібридного гена за допомогою методу полімеразної ланцюгової реакції. Показано, що використання у системі специфічного поєднання праймерів підвищує вірогідність одержаних результатів.

Біоселективний елемент сенсора поверхневого плазмонного резонансу (ППР) для розпізнавання олігонуклеотидних послідовностей, пов'язаних з гібридним геном bcr-abl, створено шляхом іммобілізації на сенсорній поверхні тіольованих одноланцюгових олігонуклеотидів та 6-меркапто-1-гексанолу. Олігонуклеотид з 24 основ, який репрезентує ділянку стикування гібридного гена і складається з однакових за довжиною фрагментів обох вихідних генів, був використаний як проба для іммобілізації на сенсорній поверхні. Відбір послідовності цього олігонуклеотиду базувався на GC складі та здатності до внутрішньо- та міжмолекулярних взаємодій, теоретично передбаченої за допомогою веб-сервера DINAMelt. Формування біоселективного елементу і наступні етапи гібридизації з комплементарними олігонуклеотидами контролювали в режимі реального часу, користуючись експериментальним макетом спектрометра "Плазмон ППР-4м", розробленого в Інституті фізики напівпровідників НАН України. Показано, що тіольовані одноланцюгові олігонуклеотиди mod-Ph успішно іммобілізуються на золотій поверхні вимірювальної комірки спектрометра ППР у 0,5 M KH2PO4 (рН 3,8). Між іммобілізованими mod-Ph та комплементарними олігонуклеотидами P1 відбувалася специфічна гібридизація, в той час як введення некомплементарних олігонуклеотидів сенсорного відгуку не викликали. Експериментальні сенсорні відгуки, одержані при взаємодіях досліджуваних олігонуклеотидів на сенсорній поверхні, досить добре узгоджуються з теоретичними розрахунками термодинамічних параметрів цих взаємодій.

The primary structure of Bcr PH domain is analyzed by using biological databank. To obtain the experimental secondary structure content of the recombinant PH protein, CD spectra were measured at 200 - 240 nm. The data observed correlate to ones for PH domains with determined structure.

Bcr/abl гібридний ген є невід'ємною характеристикою хронічної мієлоїдної лейкемії (ХМЛ) і значної кількості випадків гострого лімфобластного лейкозу (ГЛЛ). Саме експресія цього гена обумовлює початок чи один з етапів розвитку цих захворювань. На молекулярному рівні ХМЛ відрізняє від ГЛЛ наявність додаткових 3 - 10 екзонів (відповідно Dbl, PH домени) bcr частини гібридного гена/білка. За допомогою секвенування продуктів полімеразної ланцюгової реакції цієї області проаналізовано появу в ній мутацій під час бластної кризи, грунтуючись на функції згаданого домену, вивчено розподіл актину в цей період. Встановлено наявність мутації в положенні 2109 bcr/abl мРНК (транзиція T на C), що призводить до заміни Phe547 на LeU547. Флуоресцентна мікроскопія клітин еритробластної кризи ХМЛ за допомогою FITC-фалоїдину свідчить про парамембранну локалізацію актину.