Изучена экспрессия изоформ адаптерного белка CIN85/Ruk в тритон X-100-растворимых экстрактах 9-ти образцов светлоклеточной карциномы почки человека методом иммуноблотинга. Согласно полученным данным, основные иммунореактивные полосы в исследованных опухолевых и контрольных образцах (морфологически нетрансформированная ткань, изолированная из того же прооперированного органа при радикальной нефрэктомии) отвечают белкам с молекулярными массами 85, 70, 56 и 31 кДа. Установлено достоверное снижение уровня экспрессии CIN85/Ruk с молекулярной массой 85 кДа в большинстве образцов опухолей (в 5-ти образцах из 9-ти) по сравнению с контрольными образцами. Предположено, что снижение уровня экспрессии адаптерного белка CIN85/Ruk в опухолях почки человека может приводить к потере согласованного контроля процессов апоптоза и пролиферации в трансформированных эпителиальных клетках.

Уперше одержано й охарактеризовано монокліальні антитіла до N-кінцевого SH3A домену адаптерного білка Ruk/CIN85. Досліджено особливості експресії ізоформ Ruk/CIN85 у пухлинах нирки, передміхурової залози та головного мозку людини на рівні мРНК та на рівні білка. Установлено зниження, а також підвищення експресії повнорозмірної форми Ruk/CUIN85 у зразках світлоклітинної карциноми нирки людини у порівнянні з відповідними контрольними зразками. Виявлені зміни у рівні експресії <$Eroman {Ruk sub I "/"CINK85}> корелюють зі ступенем злоякісності досліджених зразків пухлин. Показано, що зниження рівня експресії <$Eroman {Ruk sub I "/"CINK85}> у зразках світлоклітинної карциноми нирки людини супроводжується змінами субклітинної локалізації адаптерного білка - транслокацією до ядра та переважним накопиченням у примембранній зоні. Низький рівень експресії або практичну відсутність p85 продемонстровано у зразках аденокарцином передміхурової залози людини, а у разі доброякісної гіперплазії детектовано значний поліморфізм у рівні експресії досліджуваного адаптерного білка. Серед аденокарцином мінімальний рівень експресії Ruk/CINK85 відповідав зразкам з найагресивнішими параметрами злоякісного росту (ступінь злоякісності <$Eroman {G sub 3 ~-~G sub 4 }>). Показано суттєве зниження рівня експресії <$Eroman {Ruk sub I "/"CINK85}> у центральній ділянці зразків гліобластом у порівнянні з периферійною ділянкою, що обернено корелює з рівнем експресії рецептора епідермального фактора росту (ERGFR).

Зазначено, що адаптерні білки відіграють важливу роль у білково-білкових взаємодіях, що забезпечують формування сигнальних мереж. Ці білки не лише залучають зв'язувальні білки-партнери до специфічних компартментів усередині клітини, але також регулюють їх активність. Адаптерний білок Ruk/CIN85 і його структурний і функціональний гомолог CD2AP/CMS є важливими компонентами численних регуляторних шляхів, залучених до контролю проліферації, адгезії, інвазії та виживання клітин, і тому вони можуть відігравати важливу роль у канцерогенезі матки. Представлено результати порівняльного дослідження експресії Ruk/CIN85 і CD2AP/CMS як на рівні mPHK, так і на рівні білка, в інтактних тканинах матки та в доброякісних і злоякісних пухлинах матки різного гістологічного типу. У більшості випадків виявлено зростання рівнів експресії мРНК і білка повнорозмірної форми Ruk/CIN85 і білка CD2AP/CMS у пухлинах матки у порівнянні з оточуючою їх нормальною тканиною. Характерною особливістю умовно нормальних тканин матки, як і доброякісних пухлин, є високий вміст високомолекулярних форм Ruk/CIN85 розміром 140 і 130 кДа, тоді як зростання вмісту низькомолекулярних форм Ruk/CIN85 розміром 40 і 30 кДа виявлено у зразках злоякісних пухлин. Результати досліджень дозволяють припустити, що аномальна експресія адаптерних білків Ruk/CIN85 і CD2AP/CMS у пухлинах матки та відповідні можливі зміни функціональної активності розташованих нижче сигнальних шляхів можуть бути залучені до підтримання злоякісного фенотипу.

Субклітинну локалізацію адаптерного білка Rukl досліджено в клітинах ембріональної нирки людини лінії НЕК293, трансфікованих вектором <$E pRc "/"CMV2"/"Ruk sub l - Glu - tag>. Імунофлуоресцентний аналіз показав, що рекомбінантний білок дифузно розподілений в цитоплазмі і ядрі трансфікованих клітин НЕК293 з формуванням чітких пунктатів, локалізованих в ядрі, які, найімовірніше, відповідають ядерцям. Ядерна локалізація Rukl підтверджена імуноблотингом екстрактів ізольованих ядер трансфікованих клітин НЕК293 з використанням моноклональних анти-Glu-tag антитіл, а також нетрансфікованих клітин НЕК293 і клітин U937 з використанням поліклональних анти-Ruk антитіл. Імунодот-блот аналіз виявив здатність афінно очищеного препарату Rukl Glu-tagged взаємодіяти з ДНК тимусу теляти, але не з ДНК Escherichia coli. Ядерна локалізація Rukl дозволяє передбачити виконання адаптерним білком нових, поки що не з'ясованих, функцій в ядрі еукаріотичної клітини.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е0*725.111.3

Рубрики:

Загальна біологія

Шифр НБУВ: Ж21341/а Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Е60*725.111.3

Рубрики:

Загальна зоологія

Шифр НБУВ: Ж21341/а Пошук видання у каталогах НБУВ 

Метод анализа ферментативной активности в полиакриламидном геле основывается на высокоэффективном разделении белков SDS-электрофорезом с их последующей ренатурацией и детекцией ферментативной активности. Этот метод использован для анализа экспрессии ДНК-аз в клетках в культуре линий HEK293, NIH 3T3, U937. Установлено, что в клетках HEK293 єкспрессируются ДНК-азы с молекулярной массой 47 и 45 кДа. Показано присутствие этих ДНК-аз в изолированных ядрах клеток HEK293. Установлено, что индукция апоптоза в клетках HEK293 приводит к возрастанию уровня синтеза ДНК-азы p47 и к экспрессии новой ДНК-азы с молекулярной массой 50 кДа. Предположено, что выявленные ДНК-азы могут участвовать в деградации ДНК в процессе апоптоза клеток HEK293.

Індекс рубрикатора НБУВ: Р569.133.1 + Р569.714.1

Рубрики:

Пухлини молочних (грудних) залоз

Пухлини матки

Шифр НБУВ: Ж21341/а Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Р569.69

Рубрики:

Пухлини сечостатевої системи (онкоурологія)

Шифр НБУВ: Ж21341/а Пошук видання у каталогах НБУВ