Проаналізовано будову імунної системи та становлення її у філо- та онтогенезі, клітинні та молекулярні основи функціонування. Висвітлено основні прояви імунного захисту та імунологічної толерантності, розлади імунітету, особливості імунокорекції. Розглянуто питання імунобіотехнології, описано механізми імунологічного розпізнавання, активації та диференціювання клітин імунної системи.

Проанализированы структура иммунной системы и становление её в фило- и онтогенезе, клеточные и молекулярные основы функционирования. Освещены основные проявления иммунной защиты и иммунологической толерантности, расстройства иммунитета, особенности иммунокоррекции. Рассмотрены вопросы иммунобиотехнологии, изучены механизмы иммунологического распознавания, активации и дифференцирования клеток иммунной системы.

Розглянуто фізико-хімічну структуру та біологічні властивості фібриногензв'язуючих білків золотистого стафілокока та подібних до нього компонентів інших видів бактерій (Clfa, ClfB, Ear, Efb). Узагальнено літературні дані та результати досліджень фізико-хімічної структури, фізіологічної ролі, цитотоксичних, антигенних властивостей тейхоєвих кислот бактерій. Висвітлено роль ліпополісахаридів грамнегативних бактерій у формуванні та реалізації патогенних властивостей.

Рассмотрена физико-химическая структура и биологические свойства фибриногенсвязующих белков золотистого стафилоккока и подобных ему компонентов других видов бактерий (Clfa, ClfB, Ear, Efb). Обобщены литературные данные и результаты исследований физико-химической структуры, физиологической роли, цитотоксических, антигенных свойств тейхоевых кислот бактерий. Освещена роль липополисахаридов грамнегативных бактерий при формировании и реализации патогеннных свойств.

Diagnostic test-systems for rapid and effective assessment of antidiphtheria immunity are developed. The prototypes of immunochemical test-systems based on enzyme-linked immunosorbent and immunochromatographic assays for detection of antibodies to diphtheria toxin subunits A and B in human serum are presented. It was suggested to use recombinant subunits of diphtheria toxin as antigens that allowed to define the specificity of antidiphtheria antibodies in human sera.

Аналіз антигенної будови пролін-багатої області 536-566 пертактину (Р.69) Bordetella pertussis було проведено за допомогою поліклональних антитіл кролів до синтетичних пептидів: KAPPAPKPAPQPGPQPP (17P), QPPQPQPEAPAPQP (14P), GPQPPQPPQP (10P), PGPQPP(6P). Встановлено локалізацію 5 спільних для пептидів та пертактину лінійних епітопів: KAPPAPKPAPQ, QPPQPQPEA, GPQPPQPPQP, GPQPP, QPPQP. Обговорено перспективність використання пептидів 10P, 14P та 17P як потенційних компонентів синтетичних вакцин проти кашлюку. Продемонстровано можливість використання методу антиген-специфічного блотингу сироваткових антитіл, розділених ізоелектричним фокусуванням, для аналізу перехресних реакцій антипептидних сироваток. Вивчено особливості гуморальної імунної відповіді на пептид-білкові кон'югати. Запропоновано оригінальний підхід для визначення антитіл до пептидів у складі кон'югатів при наявності антитіл до залишку кон'югуючого агенту.

Показано, що відмінності у чутливості клітин мишей і приматів до дифтерійного токсину (ДТ) можуть бути обумовлені не лише різною спорідненістю токсину до їх рецепторів, але й процесами, що відбуваються після проникнення токсину всередину клітини. Показано роль ДТ у пригніченні антитоксичної імунної відповіді. Імуносупресивний ефект ДТ доведено також математичною моделлю, яка наближено до реальності описує різні форми перебігу захворювання. Розроблені імуноферментні й імунохроматографічні тести для виявлення ДТ та антитіл проти субодиниць ДТ можуть бути використані для вдосконалення діагностики дифтерії.

Разработан высокоэффективный и недорогой лабораторный способ получения и очистки поликлональных антител (ПКАТ) против поверхностного клеточного маркера CD34 человека. Показано, что клонированный в клетки E. coli негликозилированный рекомбинантный белок, содержащий внеклеточный фрагмент антигена CD34 человека, при выделении из бактерий сохраняет необходимые антигенные детерминанты и при иммунизации индуцирует продукцию специфических ПКАТ, способных распознавать нативный антиген на поверхности клеток. Полученные антитела можно использовать для фенотипирования CD34<^>+ клеток методами иммуноцитохимии и проточной цитометрии.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е0*74*871 + Е70*743.321

Рубрики:

Загальна біологія

Біологія людини

Шифр НБУВ: Ж60216 Пошук видання у каталогах НБУВ 
Повний текст  Наукова періодика України 

Определены уровни антител против рекомбинантных аналогов антигенов Mycobacterium bovis rMPB63 и rMPB83, а также против деривата туберкулина PPD в 94 образцах сывороток крови крупного рогатого скота. Предложена схема статистического анализа распределений уровня антител к исследованным антигенам с помощью аппроксимации совокупностью кривых Гаусса по алгоритму Левенберга - Маркуардта. Полученные результаты указывают на возможность использования наряду с традиционным антигеном PPD рекомбинантных антигенов MPB63 и MPB83 для создания тест-систем, применимых при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота на уровне стад.

Мета роботи - розробити підхід для детекції scFv та їх комплексів з антигенами. Сконструйовано гібридні білки, які містять послідовності scFv до субодиниці B дифтерійного токсину і стафілококового білка A, та з використанням імунохімічних методів охарактеризовано одержані біфункціональні молекули. Показано, що scFv, злиті з білком A, та їх комплекси з антигеном можна ефективно виявляти міченими імуноглобулінами довільної антигенної специфічності. Висновки: злиття з фрагментом білка A є перспективним підходом, що дозволяє підвищити ефективність застосування scFv в імуноферментному аналізі. Одержані scFv, об'єднані із білком A, можуть бути використані під час створення тест-систем для виявлення дифтерійного токсину.

Мета роботи - відібрати scFv, які можуть нейтралізувати дифтерійний токсин. З використанням протокової цитофлуориметрії досліджено здатність специфічних scFv блокувати взаємодію міченого рецепторзв'язувального фрагмента токсину з поверхнею чутливих клітин. Виокремлено чотири scFv, яким притаманні властивості нейтралізувати токсин. Висновки: одержані scFv можуть стати перспективними кандидатами на роль антитоксичних протидифтерійних препаратів нового покоління.

Одержано рекомбінантний аналог секреторної форми гепаринзв'язувального фактора росту людини (sHB-EGF), що подібний до епідермального фактора росту, і досліджено його функціональну активність, а також можливості створення на його основі тест-системи для виявлення дифтерійного токсину (ДТ). Показано здатність одержаного sHB-EGF зв'язувати ДТ і гепарин, а також стимулювати in vitro проліферацію клітин лінії 3Т3, що походить з фібробластів мишей лінії Balb/c. Константа афінності рекомбінантного sHB-EGF до ДТ, розрахована за методом Фріге, становила <$E1,67~cdot~10 sup 8~roman М sup -1>, що відповідає константі афінності природної форми рецептора. Рекомбінантний sHB-EGF використано замість перших антитіл в імуноензимному "сендвіч"-аналізі для виявлення ДТ. Чутливість розробленого методу становила 1,9 нг/мл. Одержаний біотехнологічний продукт може набути застосування як компонент тест-систем для діагностики дифтерії або лікарських засобів для стимуляції регенеративних процесів, а також як реагент для фундаментальних досліджень.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е60*444*74*727 с8

Рубрики:

Загальна зоологія

Шифр НБУВ: Ж100178 Пошук видання у каталогах НБУВ 
Повний текст  Наукова періодика України 

MPB63 і MPB83 - потенційно важливі для серологічної діагностики туберкульозу протеїни Mycobacterium bovis, що заслуговують на особливу увагу завдяки своїм імунобіологічним властивостям. Шляхом об'єднання послідовностей генів mpb63 та mpb83 M. bovis одержано експресійний вектор та відповідний химерний протеїн MPB63-MPB83, який може бути очищений за допомогою металоафінної хроматографії. Дослідження антигенних властивостей одержаного рекомбінантного протеїну в експериментах з використанням сироваток кролів, імунізованих антигенами MPB63 і MPB83, показали не лише відповідність антигенної структури злитого протеїну та його складових, а й можливість досягти вищого рівня сигналу в ІЕА з використанням химерної конструкції, ймовірно, завдяки кращим сорбційним властивостям. Визначено рівень антитіл проти злитого протеїну MPB63-MPB83 в сироватках крові умовно здорових, імунізованих вакциною БЦЖ, експериментально заражених різними видами мікобактерій (M. bovis, М. intracellulare, М. scrofulaceum, М. fortuitum) та хворих на лейкоз корів. Результати цих експериментів свідчать, що високий рівень антитіл проти злитого протеїну MPB63-MPB83 спостерігався лише у тварин, заражених M. bovis. Отже, одержаний генетично злитий протеїн MPB63-MPB83 в перспективі може бути використаний у ході розроблення імуноензимних тест-систем для діагностики туберкульозу великої рогатої худоби.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е60*74*726 + Р54-4

Рубрики:

Загальна зоологія

Фтизіологія

Шифр НБУВ: Ж100178 Пошук видання у каталогах НБУВ 
Повний текст  Наукова періодика України 

Гепаринзв'язувальний EGF-подібний фактор росту - HB-EGF, що належить до EGF-родини ростових факторів, відіграє важливу роль у багатьох фізіологічних і патологічних процесах. Антитіла є важливим інструментом для дослідження функцій HB-EGF за нормальних та патологічних умов. Виділено й вивчено деякі властивості рекомбінантних одноланцюгових варіабельних фрагментів антитіл (scFv-антитіл), специфічних до HB-EGF. Для цього сконструювали фагову імунну бібліотеку scFv-антитіл миші, імунізованої рекомбінантним розчинним HB-EGF людини. Після скринінгу бібліотеки проти HB-EGF було виділено 2 групи клонів антитіл, що характеризувалися різними наборами рестриктних фрагментів. По одному клону з кожної групи (scFv 5А та 7Е) було охарактеризовано. Показано, що scFv із цих клонів здатні зв'язуватися і з людським, і з мишачим HB-EGF. Обидва клони розпізнавали цільовий антиген у вестерн-блоті, але лише за нередукуючих умов. Методом конфокальної мікроскопії також продемонстровано специфічне зв'язування scFv 5А та 7Е з клітинами лінії Vero, які характеризуються високим рівнем HB-EGF на поверхні клітини. Одержали scFv-антитіла проти розчинного HB-EGF, які придатні для різних видів імунохімічного аналізу, зокрема для застосування в сорбційному імуноензимному аналізі, імуноблотингу та імуноцитохімії. Імовірно, такі scFv-антитіла можуть бути також використані в дослідженнях HB-EGF та для розроблення нових діагностичних і терапевтичних засобів.

The humoral immune response in mouse lines C57BL and BALB/C on teichoic acid, a heteropolymer from the cell wall of S. aureus, and the conjugate of teichoic acid with ovalbumine is studied. It is established that teichoic acid has immunogenic properties. The mouse line C57BL is characterized by a high immune response to teichoic acid, but the mouse line BALB/C has demonstrated a low response.

Gene fragments mpb83 and mpb63 from Mycobacterium bovis BCG were amplified using PCR. Plasmids containing mpb63 and mpb83 fragments have been constructed using the expression vector pET24a (Novagen). Expression of recombinant proteins was obtained in E. coli Rosetta (DE3) cells under control of strong T7 promoter. Lysates were analyzed by immunoblotting with anti HisTag conjugate. His-Tag fusion proteins were purified with batch metal affinity chromatography under denaturative conditions. Results are expected to lay groundwork for the further development of improved diagnostic tools or vaccines against human and bovine tuberculosis.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е422.28*445.15 + Р54

Рубрики:

Мікобактерії Mycobacteriaceae; Mycobacterium

Фтизіологія

Шифр НБУВ: Ж22412/а Пошук видання у каталогах НБУВ 
Повний текст  Наукова періодика України 

The diphtheria toxin is the main pathogen of Corynebacterium diphtheriae. This is a protein with molecular weight 58,360. Having penetrated into endosomes of sensitive cells, diphtheria toxin is digested into two subunits: A and B. Fragments of diphtheria toxin's gene which encode subunits A and В have been amplified from genomic DNA of Corynebacterium diphtheriae strain NCTC 10648. Plasmids containing subunit A and subunit В have been constructed using expression vector pET24a. Expression of recombinant subunits was performed in E. coli strain Rosetta (DE3) cells under control of strong T7 promoter. Recombinant proteins were purified from cell lysate under denaturating conditions by affinity chromatography. Antigen properties were confirmed by western blot analysis.

Індекс рубрикатора НБУВ: Р514.23 + Р264.936

Рубрики:

Дифтерія

Паличка дифтерії

Шифр НБУВ: Ж22412/а Пошук видання у каталогах НБУВ 
Повний текст  Наукова періодика України 

У процесі отримання пептид-білкових кон'югатів глутаральдегідним методом на молекулі-носієві з'являються антигенні детермінанти, до складу яких входять залишки глутарового альдегіду (ГА) та блокувального аміну, як правило, гліцину. Серед антитіл, спрямованих до цих антигенних детермінант, виявлено антитіла, специфічні до блокувального агента. На афінному сорбенті гліцин- оксиран- сефароза виділено антитіла, яким притаманна чітко виражена специфічність до залишку гліцину. Такі антитіла розпізнавали залишок гліцину, кон'югований з білками за допомогою ГА та з глікогеном за допомогою біс-оксирану, але не розпізнавали інші амінокислоти у складі аналогічних кон'югатів. Таким чином, залишок гліцину є імунодомінантною групою епітопа, який розпізнається даними антитілами. Припущено, що білки, оброблені ГА, можна використовувати для отримання високоспецифічних антитіл до амінокислот та інших амінів.

Антигенну структуру декапептиду GPQPPQPPQP (10Р) вивчено за допомогою антисироваток, отриманих від трьох кролів, імунізованих кон'югатом декапептиду з гемоціаніном равлика (KLH-10P). Для визначення пептидспецифічних антитіл за допомогою непрямого імуноферментного аналізу (IФА) використовували кон'югати пептидів 10Р, 6Р (PGPQPP) і 4Р (РQPP) з овальбуміном. короткі синтетичні пептиди PQP, QPP, PQPP, PGPQPP використано як aнтигeни для кoнкуpeнтного aнaлізу. Показано, що антитіла до 10Р розрізняються за специфічністю до його коротких фрагментів. Трипептиди PQP і QPP розпізнавалися антитілами в конкурентному IФА. Ефективність взаємодії коротких пептидів із сироватковими антитілами зростала в залежності від довжини пептиду. У складі двох сироваток виявлено антитіла до глутарового альдегіду (ГА), який використовувався як зшивальний агент при кон'югації 10Р з носієм. Блокування у двох сироватках ГА-специфічних антитіл за допомогою гаптена Gly-ГА-Gly дозволило значно підвищити ефективність аналізу антитіл, які розпізнають короткі послідовності PQP і QPP.

Введення екзогенного антигену, яким є антитоксична протидифтерійна сироватка коней, може загрожувати розвитком віддалених ускладнень, перш за все, аутоімунного та алергічного характеру. Тому кількісне виявлення дифтерійного токсину й антитоксичних антитіл у крові та розробка методів прогнозування перебігу захворювання з метою вдосконалення серотерапії є важливим завданням. Створено математичну модель інфекційного процесу у разі дифтерії, яка є системою з 6 диференціальних рівнянь, за допомогою яких описується динаміка вмісту дифтерійного токсину, антитоксичних антитіл у сироватці крові, кількості корінебактерій і макрофагів у вогнищі запалення. Запропонована математична модель у разі введення в неї клінічних даних дозволяє зробити прогностичні висновки щодо протікання інфекції, рівня токсину Corynebacterium diphtheriae і протидифтерійних антитоксичних антитіл у сироватці крові хворих на дифтерію, що дає можливість розрахувати індивідуальну дозу антитоксичної сироватки для кожного хворого.

Індекс рубрикатора НБУВ: Р264.936-8

Рубрики:

Паличка дифтерії

Шифр НБУВ: Ж21341/а Пошук видання у каталогах НБУВ