Цель работы - исследовать роль С-концевого домена лейцил-тРНК синтетазы Т. thermophilus (ЛейРСТТ) в реакциях аминоацилирования и редактирования. Мутант ЛейРСТТ без С-концевого домена (<$E DELTA>С) получен методом мутагенеза. Кинетические константы в реакции аминоацилирования ЛейРС и ее мутанта <$E DELTA>С определены с помощью методов ферментативной кинетики стационарного состояния. Для оценки вклада С-концевого домена во взаимодействие фермента с тРНК<^>Leu методом флуоресцентного титрования рассчитаны Kd комплекса тРНК с ЛейРСТТ и ее мутантом <$E DELTA>С. Показано, что С-концевой домен играет существенную роль в реакциях аминоацилирования и редактирования ЛейРСТТ и не существен для активности в реакции активации аминокислоты. Определены кинетические параметры в реакции аминоацилирования ЛейРС и <$E DELTA>С мутанта для тРНК<^>Leu и тРНК<^>Tyr, анализ которых свидетельствует о том, что С-домен не является критическим для проявления специфичности фермента в узнавании гомологичной тРНК. Выявлено значительное влияние С-концевого домена на величину каталитической константы реакции аминоацилирования. Делеция последнего приводит к снижению kcat в 152 раза. Выводы: С-концевой домен ЛейРСТТ эволюционно приобретен для повышения скорости катализа в реакциях аминоацилирования и редактирования и не вносит существенного вклада в обеспечение специфичности фермента при узнавании тРНК.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е422.149.25*444*721

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

---

  Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"