Цель работы - клонирование и секвенирование лейцил-тРНК синтетазы Т. thermophilus (ЛейРСТТ) с последующим созданием генно-инженерной конструкции для экспрессии белка в клетках Е. coli и его выделение. Поиск гена ЛейРСТТ проводили c помощью метода Саузерн-блот-гибридизации с хромосомной ДНК, где в качестве зондов использованы меченные дигоксигенином ПЦР-фрагменты ДНК. Ген ЛейРС из клеток Т. thermophilus HB27 клонирован и секвенирован. Открытая рамка считывания кодирует полипептид длиной 878 аминокислотных остатков (молекулярная масса 101 кДа). Сравнение аминокислотной последовательности ЛейРСТТ с таковыми гомологичных ферментов из других организмов показало, что она входит в группу аналогичных ферментов прокариотов, образуемую белками протобактерий, риккетсий, а также митохондрий эукариотов. Полученное филогенетическое древо ЛейPC демонстрирует дихотомическое разветвление на две линии: прокариото/митохондриально-эукариотические и архейно/цитоплазмо-эукариотические белки. Отличия между прокариотической и архейной ветвями филогенетического древа ЛейРС в первую очередь связаны со структурой двух доменов фермента - корректирующего и С-концевого. Для экспрессии гена ЛейРСТТ в клетках Е. coli соответствующий ген клонирован в экспрессирующий вектор рЕТ29b. Выводы: клонированный ген leuS Т. thermophilus и экспрессирующийся рекомбинантный белок будут использованы для структурно-функциональных исследований ЛейРСТТ, включая рентгеноструктурный анализ фермента и его мутантных форм в комплексе с различными субстратами.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е0*440.44 + Е0*443.1

Рубрики:

Загальна біологія

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

---

Додаткова інформація про автора(ів) публікації:
(cписок формується автоматично, до списку можуть бути включені персоналії з подібними іменами або однофамільці)

• Коваленко Оксана Петрівна (біологічні науки)
• Коваленко Олександр Петрович (медичні науки)
• Коваленко Оксана Павлівна (1980–) (педагогічні науки)
• Коваленко Ольга Петрівна (філологічні науки)

  Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"