Нідялкова Н. А. Протеаза Streptomyces sp. 12: очищення і властивості / Н. А. Нідялкова, Л. Д. Варбанець, В. В. Шепелевич, П. П. Зелена, Ю. М. Юмина, К. Г. Гаркава, Л. О. Трошина // Мікробіол. журн.. - 2017. - 79, № 2. - С. 33-47. - Бібліогр.: 23 назв. - укp.Мета роботи - оптимізувати умови культивування Streptomyces sp. 12 для забезпечення максимального синтезу протеаз, одержати очищений препарат протеази, дослідити її субстратну специфічність, фізико-хімічні властивості та функціональні групи активного центру. Оптимізацію умов культивування за допомогою однофакторних експериментів проводили на базовому середовищі наступного складу(г/л): K2HPO4 - 1; <$Eroman {MgSO sub 4 ~cdot~7H sub 2 O}~-~1>; NaCl - 1; (NH4)2SO4 - 2; CaCO3 - 2; крохмаль - 10; розчин солей мікроелементів (<$Eroman {FeSO sub 4 ~cdot~7H sub 2 O~-~1}>, <$Eroman {MnCl sub 2 ~cdot~4H sub 2 O~-~1}>, <$Eroman {ZnSO sub 4 ~cdot~7H sub 2 O~-~1}>) - 1 мл. Загальну казеїнолітичну (протеолітичну) активність визначали кількісно за тирозином, що утворюється під час гідролізу казеїну під дією досліджуваного ензиму. Для виділення та очищення ензиму застосовували осадження (NH4)2SO4 90 % насичення, хроматографію на нейтральних та заряджених TSK-гелях. Встановлено, що оптимальними джерелами карбону, нітрогену і мінерального живлення у поживному середовищі є кукурудзяне борошно, (NH4)2SO4 і CaCl2, відповідно. У разі вирощування Streptomyces sp. 12 за глибинних умов культивування протягом трьох діб в 200 мл оптимізованого поживного середовища за початкового значення pH 7,0, температури <$E37~symbol Р roman C>, швидкості обертання качалки 220 об/хв питома протеолітична активність становила 62,7 <$Eroman {од~cdot~мг}> протеїна<^>-1, що в 4,8 разу вище у порівнянні з контролем (базове середовище). Фракціонуванням сульфатом амонію, гель-фільтраційною та іонообмінною хроматографією на TSK-гелях - Toyopearl HW-55, DEAE 650(М) і Sepharose 6В було отримано протеазу Streptomyces sp. 12 з питомою активністю 538 <$Eroman {од~cdot~мг}> протеїна<^>-1 і виходом 35,8 %. Молекулярна маса протеази Streptomyces sp. 12 складала ~35,6 кДа. Показано, що ензим проявляє найвищу активність до колагену та меншу - до казеїну, альбуміну і желатину. Інгібування групоспецифічними реагентами виявило, що досліджувана протеаза є метапопротеазою з оптимальними умовами дії на колаген за pH 8,0 і температури <$E50~symbol Р roman C>. Висновки: одержана протеаза Streptomyces sp. 12 з питомою протеолітичною активністю 538 <$Eroman {од~cdot~мг}> протеїна<^>-1, що в 8,6 разу вище, ніж активність у супернатанті культуральної рідини. Індекс рубрикатора НБУВ: Е422.384.3*72 + Е40*725.111.434
Рубрики:
Шифр НБУВ: Ж22205 Пошук видання у каталогах НБУВ Додаткова інформація про автора(ів) публікації: (cписок формується автоматично, до списку можуть бути включені персоналії з подібними іменами або однофамільці) ![](/irbis_nbuv/images/info.png) Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"
|