Hrushanyk N. V. Construction of model strain of yeast Saccharomyces cerevisiae with regulated expression of recombinant human alpha-synuclein = Конструювання модельного штаму дріжджів Saccharomyces cerevisiae з регульованою експресією альфа-синуклеїну людини / N. V. Hrushanyk, Y. I. Fedorko, O. V. Stasyk, O. G. Stasyk // Біол. студії. - 2021. - 15, № 3. - С. 41-50. - Бібліогр.: 14 назв. - англ.Відомо, що однією з причин хвороби Паркінсона є неправильний фолдинг і накопичення агрегатів alpha-синуклеїну. Найважливішим чинником, що впливає на процес агрегації alpha-синуклеїну, є рівень цього білка в нейронах, який залежить від балансу рівноваги між його синтезом, деградацією та секрецією. За певних умов, коли синтезується велика кількість alpha-синуклеїну, мономери цього білка можуть агрегувати на ліпідній мембрані, що призводить до утворення амілоїдів, фібрил і протофібрил, не здатних виконувати фізіологічні функції. Оскільки вивчення властивостей alpha-синуклеїну in vivo є неможливим, дослідники активно послуговуються модельними біологічними системами (одноклітинні мікроорганізми, лінії людських клітин, тваринні моделі тощо). Мета дослідження - сконструювати рекомбінантний штам S. cerevisiae з регульованою експресією людського alpha-синуклеїну для дослідження властивостей цього білка в умовах in vivo та скринінгу низькомолекулярних сполук, що впливають на його агрегацію та деградацію. Методом електротрансформації отримано рекомбінатний штам S. cerevisiae з регульованою експресією alpha-синуклеїну, кон'югованого з зеленим флуоресцентним білком. Для виявлення рівня експресії відповідного білка застосовано метод Вестерн-блотингу зі специфічними антитілами, а для доcлідження внутрішньоклітинної локалізації - метод флуоресцентної мікроскопії. Внаслідок експериментальної роботи сконструйовано рекомбінатний штам S. cerevisiae, в якого кодуюча послідовність гена alpha-синуклеїну людини експресувалася з-під регульованого промотора гена ScMET25. У ході аналізу впливу різних концентрацій екзогенного метіоніну (як фактора регуляції експресії промотора ScMET25) на вміст рекомбінантного білка у клітинах дріжджів виявлено, що експресія відповідного химерного гена у модельному штамі репресується за наявності метіоніну в концентрації 10 мг/л та вище. Під час тривалого культивування клітин дріжджів цей ефект зменшувався, ймовірно, внаслідок вичерпання метіоніну в ростовому середовищі. Встановлено, що продукція рекомбінантного alpha-синуклеїну в клітинах S. cerevisiae практично не впливала на ріст клітин хазяїна, що вказує на відсутність або незначний токсичний ефект людського alpha-синуклеїну для цього виду дріжджів. Встановлено, що регульована експресія рекомбінантного alpha-синуклеїну в клітинах дріжджів S. сerevisiae може бути використана з метою скринінгу нових сполук, здатних впливати на агрегацію чи деградацію alpha-синуклеїну в клітинах дріжджів. Індекс рубрикатора НБУВ: Е521.551.1Sac + Р620.426.3-2
Рубрики:
Шифр НБУВ: Ж100193 Пошук видання у каталогах НБУВ Повний текст Наукова періодика України Додаткова інформація про автора(ів) публікації: (cписок формується автоматично, до списку можуть бути включені персоналії з подібними іменами або однофамільці) Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"
|