Скачати повний текст

Встановлено, що експресія мРНК PFKFB-2, PFKFB-3 і PFKFB-4, а також VEGF і Glut1 значно посилюється в злоякісних пухлинах грудної залози, легень та прямої кишки. Експресія PFKFB-4 виявлена в різних лініях трансформованих клітин, зокрема, простати, грудної і підшлункової залоз, печінки та легень. Розглянуто, що гіпоксія індукує експресію PFKFB-4 в різних лініях клітин, що ця індукція є HIF-зележною і опосередкована ідентифікованим залежним від гіпоксії елементом в 5'-регуляторній зоні гена. Виявлено три класи нових альтернативних сплайс-варіантів мРНК PFKFB-4 у клітинах людини та миші, визначено їх нуклеотидну послідовність. Зазначено, що більшість з них мають вставки в 6-фосфофрукто-2-кіназній частині або делеції в фруктозо-2,6-бісфосфататній частині, в наслідок чого альтернативний сплайс-варіант біфункціонального ферменту PFKFB-4 міг проявляти лише одну з двох активностей.

  Скачати повний текст

Досліджено теоретичні та практичні проблеми освітньої та практичної юридичної діяльності в країнах германської правової сім'ї: в Австрії, ФРН і Швейцарії та у порівняльному аспекті проведено їх аналіз з реаліями України з метою творчого використання кращих зарубіжних здобутків у вітчизняній освітній і практичній юридичній діяльності. Розглянуто теоретичні питання юридичної діяльності в країнах германського кола. Висвітлено особливості юридчиної освіти та поліцейської підготовки в Австрії, ФРН і Швейцарії. Проаналізовано практичну юридичну діяльність даних кран. Сформульовано конкретні пропозиції щодо покращання юридичної освіти та юридичної практики в Україні з метою вдосконалення юридичної освіти в Україні та забезпечення правової охорони та захисту громадян України.

  Скачати повний текст

Розроблено метод безперервного контролю електричних параметрів внутрішньої ізоляції конденсаторного типу (ІКТ) в маслонаповненому енергетичному обладнанні високої напруги, який забезпечує підвищення достовірності контролю в результаті врахування впливу електричного поля елементів розподільної установки. Для реалізації даного методу створено спеціальний пристрій. Розв'язано задачу розрахунку струму впливу в колі вимірювального елемента схеми контролю ІКТ. Встановлено, що достовірність пооб'єктного контролю ізоляції залежить від урахування зміни струму впливу для трансформаторів струму 750 кВ та вводів 330 кВ трифазних силових автотрансформаторів. Розроблено метод пооб'єктного безперервного контролю та удосконалено нерівноважно-компенсаційний метод контролю електричних параметрів ІКТ під робочою напругою з відтворенням впливу електричного поля елементів розподільної установки за допомогою імітаційної моделі, в якій використаний алгоритм розрахунку струму впливу. Запропоновано пристрій контролю ІКТ, який реалізує пооб'єктний та нерівноважно-компенсаційний методи, розроблено його апаратну та програмну частини.

  Скачати повний текст

Дисертація присвячена дослідженню експресії генів, що кодують локалізовані у мітохондріях ключові ензими циклу трикарбонових кислот та фактори, що контролюють процеси транскрипції і трансляції у мітохондріях, а також регулюють біоенергетику, проліферацію та апоптоз. Експресія цих генів визначалася у клітинах гліоми лінії U87 за умов повного та часткового пригнічення функціональної активності IRE1, основного сенсорно-сигнального ензиму стресу ендоплазматичного ретикулума, а також за гіпоксії та дефіциту глюкози або глутаміну. Проведені дослідження дозволяють з'ясувати можливу роль цих генів у пригніченні проліферації клітин гліоми, опосередкованому сигнальним ензимом IRE1.Вперше показано гено-специфічну залежність експресії досліджених ядерних генів протеїнів мітохондрій від функціонування IRE1, який опосередковує основний шлях стресу ендоплазматичного ретикулума, у клітинах гліоми, що свідчить про можливий вклад цих генів у анти-проліферативний ефект, обумовлений пригніченням IRE1. Виявлено, що стрес-залежна регуляція цих генів може опосередковуватись як протеїнкіназною, так і ендорибонуклеазною активностями IRE1. Показано, що пригнічення функціональної активності IRE1 модифікує чутливість експресії більшості досліджених генів до умов гіпоксії, дефіциту глюкози або глутаміну. Виявлено диференційний характер змін експресії ядерних генів, які кодують локалізовані у мітохондріях фактори та ензими, у клітинах гліоми з пригніченою активністю IRE1, що переконливо свідчить про функціональне репрограмування мітохондрій за цих експериментальних умов. Отримані результати демонструють важливу роль ядерних генів протеїнів мітохондрій у регуляції процесів проліферації та росту клітин гліоми за умови пригнічення IRE1 та розширюють уявлення про молекулярні механізми впливу на експресію цих генів гіпоксії, дефіциту глюкози та глутаміну, що є важливими компонентами пухлинного росту.Ключові слова: гліома, експресія генів, пригнічення IRE1, стрес ендоплазматичного ретикулума, протеїни мітохондрій, репрограмування мітохондрій, гіпоксія, дефіцит глюкози, дефіцит глутаміну.^UExpression of genes encoding mitochondrial enzymes of citric acid cycle and factors which controll mitochondrial transcription and translation and regulate bioenergetic status, proliferation and apoptosis was studied in this work. The expression level of these genes was investigated in glioma cell line U87 with full and partial inhibition of IRE1 functional activity, which is the main sensor enzyme of endoplasmic reticulum stress. Also influence of hypoxia and deprivation of glutamine and glucose on genes expression is investigated to assess the role of these genes in ERN1-mediated control of glioma cells proliferation, as well as under hypoxic condition and deficiency of glucose or glutamine. Present study has clarified the possible role of these genes in IRE1-mediated suppression of glioma cells proliferation.For the first time it have been shown that inhibition of IRE1-mediated ER stress signalling pathway affects the expression level of all studied nuclear genes of mitochondrial proteins in gene specific manner and thus possibly contributes to slower glioma growth. It was found that observed changes in genes expression was mediated by both kinase and endoribonuclease activities of IRE1. Furthermore, the blockade of IRE1 function modifies the effects of hypoxia and glucose or glutamine deprivation on the expression levels of almost all studied genes. Differential changes of the expression level of nuclear genes encoding mitochnodrial enzymes and factors in glioma cells under inhibition of IRE1 clearly demonstrate the phenomenon of ER stress-dependent functional reprogramming of mitochondria under these experimental conditions.The obtained results strongly suggest an important role of nuclear genes of mitochondrial proteins in glioma cell proliferation with blockade of IRE1 enzyme function and partly clarify molecular mechanisms of hypoxia and nutrient deprivation influence on the expression level of these genes.Keywords: glioma, gene expression, IRE1 inhibition, endoplasmic reticulum stress, mitochondrial proteins, reprogramming of mitochondria, hypoxia, glucose deprivation, glutamine deprivation.

Дисертація присвячена вивченню експресії пухлинозалежних генів, дерегуляція яких спостерігається при злоякісній трансформації, а їх протеїни пов'язані з процесами проліферації, апоптозу, інвазії та метастазування. Рівень експресії цих генів, а також низки мікроРНК, здійснювали у клітинах гліоми лінії U87 за умов пригнічення функції сигнального протеїну IRE, основного сенсорно-сигнального ензиму стресу ендоплазматичного ретикулума, а також сайленсінгу мРНК NAMPT, в залежності від гіпоксії, дефіциту глюкози або глутаміну. Було показано, що у клітинах гліоми лінії U87 з пригніченою активністю протеїнкінази та ендорибонуклеази або лише ендорибонуклеази сенсорносигнального протеїну стресу ендоплазматичного ретикулума IRE1 спостерігається різке зниження рівня експресії мРНК про-проліферативного гена NAMPT у порівнянні з контрольними клітинами, що свідчить про опосередкованість цих змін саме ендорибонуклеазою IRE1. Виявлено, що пригнічення IRE1 підвищує експресію miR-182, сайти зв'язування з якою були виявлені на 3'-кінцевій нетранслюючій послідовності мРНК NAMPT. Таким чином, було показано, що IRE1-залежна регуляція експресії мРНК NAMPT може відбуватись на пост-транскрипційному рівні за рахунок підвищення активності мікроРНК miR-182. Встановлено, що пригнічення функціональної активності сенсорносигнального протеїну IRE1 впливає на експресію більшості генів, пов'язаних з процесами проліферації, виживання та міграції у клітинах гліоми лінії U87, а за сайленсінгу мРНК NAMPT зафіксовані протилежно спрямовані зміни експресії генів. Показано, що пригнічення функціональної активності IRE1 по-різному модифікує чутливість експресії більшості досліджених генів до умов гіпоксії, а це є важливим фактором пухлинного росту. Виявлено, що блокада активності IRE1 модифікує вплив дефіциту глутаміну на рівень експресії більшості досліджених генів, що є одним з механізмів IRE-опосередкованого пригнічення проліферації клітин гліоми. Отримані дані демонструють дерегуляцію більшості онкогенів після сайленсінгу NAMPT та складність міжгенних взаємодій в умовах порушення функціональної цілісності в гліомах. Результати роботи мають практичне значення, оскільки є важливими для оцінки і прогнозування наслідків таргетної терапії з урахуванням побічних ефектів, а також ідентифікації потенційних мішеней для подальших досліджень та створення нових підходів боротьби з цим захворюванням. Ключові слова: гліома, експресія генів, пригнічення IRE1, сайленсінг NAMPT, стрес ендоплазматичного ретикулума, репрограмування геному, гіпоксія, дефіцит глутаміну.^UThe main research topic of the dissertation was to study molecular mechanisms of interactions at the level of gene expression in different types of tumors in order to improve and create new strategies to struggle against this disease. The current study aimed to investigate intergenic interactions in glioma cells by studying gene expression under conditions of silencing mRNA NAMPT and inhibition of the IRE1 signaling protein. For the first time it was shown that in U87 glioma cells with inhibited protein kinase and endoribonuclease activity or only endoribonuclease of IRE1, there is a decrease in the level of expression mRNA and protein of the pro-proliferative NAMPT in comparison with the control cells, indicating that these changes are mediated by endoribonuclease IRE1. Moreover, we found binding sites for miR-182 miRNAs on 3'-untranslated regions of NAMPT mRNA, and the level of this miR-182 increases under conditions 8 of IRE1 inhibition. Thus, IRE-dependent regulation expression of mRNA NAMPT can be performed at the post-transcriptional level by increasing miR-182 miRNA activity. It was shown that inhibition of the functional activity of IRE1 affects the expression of the most studied genes in U87 glioma cells, and silencing of NAMPT leads to opposite changes in mRNA expression. It has been shown that inhibition of IRE1 differentially modifies the effect of hypoxia, an important tumor growth factor, on the expression level of most studied genes. It was demonstrated that glutamine deprivation affected the expression of most studied genes in IRE1 dependent manner and that these changes possibly contributed to the suppression of glioma growth from cells without IRE1 signaling enzyme function. Dysregulation of most of the studied genes in glioma cells after silencing of NAMPT may be reflected by a complex of intergenic interactions in the conditions of metabolic changes in gliomas. This study provides unique insights into the molecular mechanisms of genome reprogramming in IRE1 and NAMPT knockdown glioma cells, are important for assessing and predicting the effects of targeted 9 therapy, and allow the identification of potential targets for further research and the creation of new approaches to combating the disease. Keywords: glioma, gene expression, IRE1 inhibition, silencing of NAMPT, endoplasmic reticulum stress, hypoxia, glutamine deprivation.

У дисертації подано розв'язання важливої науково-прикладної проблеми функціонування кримінально-виконавчої системи України в сучасних умовах її реформування та трансформації в пенітенціарну. Здійснено науково-теоретичний, історичний, методологічний аналіз функціонування пенітенціарної системи України, визначено її сучасний стан, проблеми та шляхи розвитку. Запропоновано авторське визначення пенітенціарної системи.Сформульовано авторське визначення державної політики у сфері виконання покарань і пробації та запропоновано системоутворюючі ознаки, що становлять зміст поняття «державна політика у сфері виконання покарань і пробації». Завдяки теоретичним напрацюванням та отриманим науково обґрунтованим результатам виокремлено сутнісно нові принципи державної політики у сфері виконання покарань і пробації, розкрито особливості суб'єктів її формування й реалізації. Доведено, що пенітенціарна система України сьогодні перебуває на черговому етапі свого реформування й становить комплекс державно-правових, соціально-економічних та психолого-педагогічних інститутів, які в сукупності забезпечують діяльність органів і установ Міністерства юстиції України у сфері виконання покарань та пробації відповідно до євроінтеграційного вектора розвитку нашої держави.^UThe dissertation presents the solution of the important scientifically applied problem of functioning of the penal system of Ukraine in the current conditions of its reformation and transformation into a penitentiary. The scientific-theoretical, historical, methodological analysis of functioning of the penitentiary system of Ukraine is carried out, its current state, problems and ways of development are determined. The author's definition of the penitentiary system is proposed. The specifics of organizational and legal bases of reforming the penitentiary system in Ukraine are clarified and scientifically substantiated proposals and recommendations for improving the legislation in this area and the practice of its application are developed, in particular.It is determined that the conceptual directions of penitentiary reform in Ukraine are: - improvement of the legislation regulating the activity of the penitentiary system; - optimization of the network of penitentiary institutions and their enterprises, ensuring their effective functioning and profitability (profitability) of production activities; - increasing the effectiveness of combating crime and maintaining law and order in the penitentiary system; - ensuring that the conditions of detention of detainees and convicts are brought into line with international standards, creating conditions of detention that do not violate human dignity, and preventing violations of the Convention for the Protection of Human Rights and Fundamental Freedoms.It is proposed to develop and approve at the level of the Cabinet of Ministers of Ukraine specific qualitative and quantitative criteria for deciding on the liquidation / operation of the institution, calculating the financial effect of such management decisions and assessing the risks of their adoption.The priority measures to improve the staffing of penitentiary bodies and institutions are revealed:- optimization of the number of staff of penitentiary bodies and institutions, adoption of the program normative document on staffing of the penitentiary system;- development of the system of staffing the probation service and the system of training probation volunteers;- proper monitoring of the quality of educational services provided by specialized educational institutions that provide training for penitentiary bodies and institutions;- real demilitarization and revision of the system of attestation of personnel of penitentiary bodies and institutions;- implementation of the policy of attracting volunteers and new staff for penitentiary bodies and institutions.The definition of the concept of "policy in the field of execution of punishment and probation" is formed - these are the principles and goals that the state implements in the creation and application of criminal executive law, defining goals, principles, strategies, activities of penitentiary bodies and institutions. probation, their forms and methods.It is determined that a separate category should be allocated to entities that contribute to the implementation of policies in the field of execution of punishment and probation. It is proposed to include units of the National Police of Ukraine that respond to convicts and other persons who do not comply with the court decision in terms of serving the sentence and local governments, which, among other things, contribute to the execution of community service and restraint of liberty.It is determined that the role and place of the prosecutor's office in the system of subjects of implementation of policy in the field of execution of punishment and probation should be strengthened, including taking into account its functions and powers that can be used to protect human rights and freedoms, .The author's definition of the state policy in the sphere of punishment and probation is formulated and the system-forming features that make up the concept of «state policy in the sphere of punishment and probation» are proposed. Thanks to theoretical experience and scientifically substantiated results, substantially new principles of state policy in the sphere of punishment and probation have been highlighted, and peculiarities of subjects of its formation and implementation have been revealed. It is proved that the penitentiary system of Ukraine today is at the next stage of its reformation and is a complex of state-legal, socio-economic and psychological-pedagogical institutions, which together provide the activity of bodies and institutions of the Ministry of Justice of Ukraine in the sphere of punishment and probation in accordance with the European integration vector development of our state.