Экспрессирована рекомбинантная S6K2 в бакуловирусной системе. Выделены препаративные количества гомогенного белка для биохимических исследований. Получены и охарактеризованы специфические моноклональные антитела против рекомбинантной S6K2. Изучены экспрессия и внутриклеточная локализация S6K1 и K2 в злокачественных и доброкачественных опухолях молочной железы по сравнению с аналогичными нормальными тканями. Рекомбинантный бакуловирусный вектор, экспрессирующий S6K2 дикого типа, создан с помощью Bac-to-Bac системы (Invitrogen); рекомбинантная S6K2 очищена из инфицированных Sf9 клеток с помощью метода афинной хроматографии. Получены моноклональные антитела против рекомбинантной S6K2. Специфичность полученных антител в реакции с рекомбинантной и эндогенной S6K2 изучена с помощью методов ELISA, Вестерн-блоттинга, иммунопреципитации и иммуногистохимического окрашивания. Для иммуногистохимического определения S6K1 и S6K2 в нормальных и опухолевых тканях молочной железы использовали моноклональные антитела против S6K1 и К2. Препаративные количества ферментативно активной S6K2 получали с использованием бакуловирусной экспрессирующей системы. Для получения и характеристики моноклональных антител применяли высокогомогенные препараты S6K2. В опухолях молочной железы выявлен повышенный уровень экспрессии S6K1 и S6K2 по сравнению с таковым в аналогичных нормальных тканях. S6K2 часто локализовалась в ядрах аденокарцином, но редко в фиброаденомах и нормальных тканях молочной железы. Сделан вывод, что получение препаративных количеств рекомбинантной S6K2 и

создание специфических моноклональных антител к S6K2 - эффективный способ изучения функции и регуляции этой важной сигнальной молекулы в нормальных и опухолевых клетках. Иммуногистохимический анализ экспрессии S6K1 и K2 в нормальных тканях и злокачественных опухолях молочной железы подтверждает их повышенную экспрессию в последних. Накопление S6K2 в ядрах раковых клеток может быть связано с нарушением ядерно-цитоплазматических перемещений, а следовательно, может нарушать клеточный рост и пролиферацию.

Мета: клонувати, експресувати у бакуловірусній системі (БВС) та очистити пухлинний антиген SSX2 та використати його для скринінгу сироватки крові здорових донорів та хворих на меланому. Матеріали та методи: використано БВС експресії, метод афінної хроматографії на Ni-NTA агарозі, імуноферментний аналіз для скринінгу сироватки крові хворих на меланому (n = 29) та здорових донорів (n = 27). Результати: з використанням БВС експресії клоновано та експресовано рекомбінантний антиген SSX2; SSX2 був очищений методом афінної хроматографії та використаний як антиген для ELISA. Порівнювальний аналіз сироваток крові хворих на меланому та здорових донорів виявив більш високий рівень SSX2 в сироватках хворих на меланому у порівнянні з таким у здорових донорів. Висновки: SSX2 антиген, експресований у БВС, можна застосовувати для серологічного аналізу сироватки крові онкологічних хворих.

Індекс рубрикатора НБУВ: Р569.452-2

Рубрики:

Пухлини щитоподібної залози

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Зроблено огляд асоційованих з пухлиною антигенів, методів їх ідентифікації та існуючих на сьогодні імунотерапевтичних стратегій щодо лікування раку. Особливу увагу приділено антигенам, ідентифікованим з використанням методологи SEREX (серологічна ідентифікація антигенів за допомогою рекомбінантно експресованих клонів) та наведено категорії асоційованих з пухлиною антигенів (у тому числі, ідентифікованих із застосуванням SEREX). Класифіковано головні імунотерапевтичні підходи та описано успіхи активної специфічної імунотерапії за допомогою імунодомінантних пептидів асоційованих з пухлиною антигенів.