Представлены данные по использованию современных морфоцитохимических и иммуноцитологических методов в диагностике опухолевых заболеваний кроветворной и лимфоидной тканей. За 7-летний период проведено обследование 4533 больных, включая детей, с острыми лейкозами миелоидного и лимфоидного происхождения из Киева, Крыма и 17 областей Украины. Проведено уточненное выделение различных форм и цитологических вариантов гемобластозов на основе современных классификаций, что имеет важное значение для определения прогноза и выбора оптимальных схем терапии.

Определены концентрации тяжелых металлов и свободных радикалов в опухолевой и непораженной тканях почки человека. Концентрацию свободных радикалов в ткани измеряли с помощью оригинального супероксиддисмутазного биосенсора. Обнаружено, что в нормальной ткани почки определяется более высокая концентрация некоторых металлов (медь, кадмий, цинк), чем в опухолевой; в опухолевой ткани почки выявлено более высокое содержание свободных радикалов и ряда токсических веществ, в частности бензола, чем в непораженной, при более низкой концентрации таких поглотителей свободных радикалов, как цистеин. Пониженное содержание свободных радикалов в опухолевой ткани может быть обусловлено снижением активности супероксиддисмутазы и продукцией свободных радикалов в реакциях так называемого вторичного метаболизма ряда веществ, которые поступают в ткани организма из окружающей среды.

Обобщены результаты работы международных исследовательских групп и отдельных авторов по изучению лечебного действия рекомбинантных препаратов интерферона-альфа при неходжкинских лимфомах различной степени злокачественности, Т-клеточной лимфоме кожи, болезни Ходжкина и при различных формах лейкозов (хронический миелолейкоз, волосатоклеточный лейкоз, множественная миелома). В обзоре отражены также современные представления о некоторых механизмах противоопухолевого и противолейкозного действия интерферонов и перспективах их применения в виде монотерапии и совместно с некоторыми цитостатиками.

Проведен клинико-генеалогический анализ у 262 больных раком тела матки в Межрайонном онкологическом диспансере г. Белая Церковь (Киевская обл.). Получены сведения о заболеваемости у 1777 родственников первой степени родства и 2647 - второй. Родословные 41,22 пробандов были отягощены по онкопатологии: чаще отмечались больные раком тела матки, органов женской репродуктивной системы и желудочно-кишечного тракта. В 19 случаях обнаружены синхронные и метахронные первично-множественные опухоли. Следует предположить наличие общей преддиспозиции к развитию злокачественных новообразований как у пробандов с раком тела матки, так и у их родственников. Результаты исследования свидетельствуют о необходимости диспансеризации ближайших родственников пробанда с целью выявления ранних форм злокачественных опухолей в отягощенных по онкопатологии семьях.

При культивировании родительской линии Jurkat (Jurkat/WT) с апоптоз-индуцирующими мкАТ к антигену CD95 (клон IРО-4) получена сублиния клеток Jurkat/A4. В отличие от клеток линии Jurkat/WT, на поверхности которых экспрессируется антиген CD95 (60 - 80 % антигенположительных клеток), доля CD95-пoлoжитeльных клеток сублинии Jurkat/A4 снижается до 4 %. Клетки сублинии Jurkat/A4 резистентны к индукции апоптоза не только агонистическими aнти-CD95 мкАТ, но и противоопухолевыми цитостатиками разных классов, которые индуцируют апоптоз клеток родительской линии Jurkat/WT. Полученные результаты не противоречат гипотезе о возможной роли рецептора CD95 и его лиганда в реализации цитотоксического действия противоопухолевых препаратов различных классов и механизмов действия.

Гиперпродукция так называемых холодовых агглютининов (ХА) - аутоантител, которые реагируют с антигенами аутологичных эритроцитов человека, является признаком некоторых аутоиммунных заболеваний, но особенного масштаба она достигает при некоторых злокачественных новообразованиях крови, когда ХА имеют моноклональную природу. Доказано, что моноклональные ХА вырабатываются В-лимфоцитами, которые для построения тяжелых цепей иммуноглобулиновых рецепторов всегда используют один и тот же генный сегмент - V4-34. На основании данных доступной литературы и собственных экспериментов автор предлагает гипотезу, согласно которой существенная часть нормальных В-лимфоцитов периферической крови человека, которые экспрессируют продукт V4-34, обладает способностью реагировать с аутологичными эритроцитами и удаляется из репертуара иммунной системы благодаря механизму, напоминающему "бомбу замедленного действия". Этот механизм срабатывает тогда, когда аутореактивные лимфоциты активируются в периферических лимфоидных органах через рецептор CD40. Дефект в этом механизме негативной селекции, обусловленный действием онкогенных вирусов или других факторов, возможно, приводит к экспансии определенных аутореактивных клонов клеток, экспрессирующих ХА, и их злокачественной трансформации.

С помощью специфических иммунных сывороток против опухолеассоциированного белка pp23 из клеток гепатомы Зайдела и клеток почек интактных крыс при использовании иммуноблоттинга и аффинной хроматографии удалось установить иммунологическое сходство этих белков. Инкубация препаратов pp23, выделенных из клеток почек и гепатомы Зайдела, с культурой гепатоцитов интактных крыс в одинаковой степени способствует экспрессии мембранных опухолеассоциированных белков на поверхности гепатоцитов. На основании этих данных можно считать, что белки pp23, выделенные из клеток почек крыс и клеток гепатомы Зайдела, практически идентичны. Возможные отличия на молекулярном уровне не сказываются на их иммунологических и функциональных свойствах.

Изучено влияние допамина (ДА) на гематотоксичность, обусловленную циклофосфамидом (ЦФ). ДА вводили мышам линии Swiss через 12 часов после ЦФ (200 мг/кг) в дозе 50 мг/кг в сутки на протяжении 5 суток показано, что при введении ДА нейтропения носит менее выраженный характер. Применение ДА снижает выраженность миелосупрессии, вызванной ЦФ. Результаты исследования свидетельствуют о том, что ДА способствует восстановлению кроветворения, угнетенного действием ЦФ, ускоряя возвращение гематологических параметров к норме. Таким образом, ДА может найти применение как препарат, восстанавливающий кроветворение, при цитотоксической химиотерапии пациентов с онкологическими заболеваниями.

Проанализированы изменения клеточного состава лимфоцитов селезенки и синтез белков, участвующих в регуляции апоптоза у потомства крыс с индуцированными опухолями молочной железы, матери которых содержались до и в период беременности на рационе, в состав которого входило 15 % оливкового или 7 % кукурузного масла. В возрасте 5 нед крысятам вводили дважды диметилбенз(а)антрацен (по 10 мг), после чего дальнейший анализ проводили в 3 группах животных, различающихся по рациону. Контрольной группой были крысята, которые содержались на рационе с 7 % кукурузного масла и родились от матерей, содержащихся в период беременности на этом же рационе. Опытными группами были крысята, родившиеся от матерей, которые содержались в период беременности на рационе с 15 % оливкового масла. При этом одна из опытных групп продолжала получать рацион с 15 % оливкового масла, тогда как другую переводили на рацион с 7 % кукурузного масла. Результаты эксперимента учитывали через 4 мес. Лимфоидные клетки в селезенке и инфильтратах опухолей анализировали иммуногистохимически, определяли В- и Т-клетки, а также синтез в этих клетках белков, ассоциированных с апоптозом (Fas-лиганд, р53, Всl-2). Результаты эксперимента в группах крысят, матери которых содержались на рационе с 15 % оливкового масла, зависели от того, на каком рационе в дальнейшем содержалось их потомство. При содержании матерей на рационе с 15 % оливкового масла, а потомства - на контрольном рационе в селезенке отмечалось уменьшение размеров зон, содержащих В- и Т-лимфоциты.

Если же крысята продолжали получать рацион с 15 % оливкового масла, у них отмечали признаки активации лимфоидной системы. При этом влияние такого рациона было различным в разных зонах селезенки. Увеличение размеров зародышевых центров селезенки, связанное с активацией продукции В-клеток, у потомства матерей, содержавшихся в период беременности на рационе с 15 % оливкового масла, было очевидным даже у крысят, которые перешли на контрольный рацион. Рацион с 15 % оливкового масла оказывал влияние и на состав лимфоидно-макрофагальных инфильтратов индуцированных опухолей молочной железы. Полученные данные свидетельствуют о том, что содержание крыс в период беременности на рационе с 15 % оливкового масла оказывает модулирующее действие на процессы индуцированного канцерогенеза у потомства.

У 32 больных с серозными эпителиальными опухолями яичников различной степени дифференцировки определена экспрессия белков - регуляторов апоптоза p53, Bcl-2 и антигена, ассоциированного с пролиферацией клеток (АПК). Установлено, что избыточная экспрессия мутантного белка p53 и АПК характерна для низкодифференцированных злокачественных опухолей яичников, отличающихся крайней степенью злокачественности, агрессивным течением заболевания и обширной распространенностью процесса по классификации FIGO (IIIc и IV). Опухоли с высокой степенью дифференцировки отличаются отсутствием экспрессии мутантного белка p53, низким индексом пролиферации опухолевых клеток и повышенной экспрессией белка Bcl-2. Определение экспрессии белков p53, Bcl-2 и АПК в ткани опухолей яичника, на основе полученных данных, может быть использовано для прогноза заболевания и коррекции терапии.

Рассмотрен принцип диагностики злокачественных лимфом в соответствии с новой классификацией ВОЗ. Обычные гистопатологаческие критерии обеспечивают 80 - 95 % воспроизводимость диагностики отдельных нозологических форм. Иммуногистохимические методы с использованием широкой панели моноклональных антител для распознавания опухолей В-, T- и ЕК-клеточного происхождения применяют выборочно. Детально описаны критерии, позволяющие выделять опухоли, возникающие из лимфоидных клеток-предшественников и зрелых (периферических) лимфоцитов различного происхождения. Приведена гастоморфологическая, иммунофенотипическая характеристика В-клеточных лимфом из малых лимфоцитов, В-ХЛЛ, лимфомы из клеток мантийной и маргинальной зоны, фолликулярной и лимфоплазмоцитарной лимфомы, В-крупноклеточной лимфомы и лимфомы Беркитта, Т-клеточных лимфом, лимфомы Ходжкина.

На беспородных крысах изучены кинетические, гистологические и биохимические характеристики перевиваемого холангиоцеллюлярного рака PC-1 при внутрипеченочной и подкожной трансплантации. Кинетика роста опухолевых узлов при обоих путях трансплантации сходна: медленный рост с латентным периодом (10 сут) и периодом экспоненциального роста (18 - 24-е сутки после трансплантации). При внутрипеченочной трансплантации скорость роста опухолевых узлов в 10 раз меньше, а продолжительность жизни крыс с опухолями больше, чем при подкожной трансплантации. Гистологически опухоли идентичны и представлены солидным раком с участками слизеообразования. Клетки опухоли в обоих случаях имеют низкую митотическую активность, умеренный уровень спонтанного апоптоза и некроза. Биохимические свойства опухолей сходны. Конститутивный и индуцибельный (под влиянием бензапирена) уровни активности глутатион-S-трансферазы, НАД(Ф)Н-хиноноксиредуктазы и альдегиддегидрогеназы в опухолях в 17 - 53 раз ниже, чем в печени. В наибольшей степени активность НАД(Ф)Н-хиноноксиредуктазы и альдегиддегидрогеназы снижается в опухолях, перевитых в печень. PC-1 при внутрипеченочной трансплантации может использоваться как модель для изучения регионарной химиотерапии через сосуды печени.

С помощью метода проточной цитофлуориметрии определен уровень экспрессии рецептора эпидермального фактора роста (ЭФР) и рецептора трансферрина на поверхности опухолевых клеток человека 14 перевиваемых линий. В опухолевых клетках эпителиального происхождения выявлена положительная и статистически достоверная корреляция между экспрессией рецепторов ЭФР и трансферрина. В опухолевых клетках иного гистогенеза (кроме клеток фибросаркомы линии НТ-1080) подобная корреляция не выявлена. Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что для опухолевых клеток эпителиального происхождения характерна коэкспрессия рецепторов ЭФР и трансферрина. На основании полученных данных обсуждены возможности использования антител против рецепторов ЭФР и трансферрина в терапии пациентов с онкологическими заболеваниями.

Описана радиочастотная (РЧ) система для интерстициальной гипертермии (ИГТ) при лечении больных со злокачественными опухолями головного мозга, которая состоит из золотых РЧ антенн и РЧ генератора. Модельные исследования на фантоме и в опытах на собаках показали возможность достичь необходимого температурного распределения с помощью созданных РЧ антенн. Проведены I - II фазы клинической проверки системы для ИГТ при лечении 30 больных с опухолями головного мозга. Во всех случаях были подтверждены технические возможности РЧ ИГТ и ее переносимость больными. Противоопухолевый эффект, оцененный с помощью компьютерной томографии, был следующим: полная регрессия - 5 больных, частичная - 11, стабилизация процесса - 12, прогрессирование - 2. Число полных и частичных регрессий составило 53 %. Отмечены следующие осложнения: переходящий отек мозга (6 больных), ликворея (3), геморрагия вблизи имплантирования антенн (1). Установлено, что РЧ ИГТ может быть использована в клинике при лечении больных со злокачественными опухолями головного мозга.

Изучали эндокринную функцию тимуса, коркового вещества надпочечников, щитовидной железы и состояние периферического звена иммунной системы у 104 больных с патологией тимуса (88 больных тимомой и 16 больных миастенией). Установлено, что у больных со злокачественными новообразованиями тимуса происходит угнетение эндокринной функции органа, степень которого зависит от гистологической формы опухоли. Предполагается, что в подавлении секреции тимусных гормонов важная роль принадлежит аутоантителам к эпителиальным клеткам тимуса. Установлено, что увеличение концентрации АКТГ и кортизола, а также снижение уровня гормонов щитовидной железы способствуют угнетению тимической гормональной активности у больных тимомой, что, в свою очередь, неблагоприятно отражается на деятельности периферического отдела иммунной системы.

Проводили трансфекцию клеток глиомы человека линии U251MG геном гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (КСФ-Г), заключенного в липосомы. Изучали способность клеток, трансдуцирующих ген КСФ-Г, образовывать опухоли, при введении бестимусным мышам. В контрольных опытах осуществляли трансфекцию гена резистентности к неомицину в опухолевые клетки той же линии. Выработка КСФ-Г клетками, в которые был введен ген КСФ-Г, была подтверждена результатами иммуноферментного анализа. Клетки, трансдуцированные геном КСФ-Г, не вызывали развития опухолей, в то время, как инъекция контрольных клеток приводила к образованию растущих под кожей солидных опухолей.

Проверена гипотеза о том, что мутации в рецепторе эстрогена-alpha (РЭalpha) могут быть механизмом, при помощи которого опухоли приобретают гормононезависимый фенотип и резистентность к антиэстрогенной терапии. Аспирационные биоптаты были взяты у больных с метастазирующим раком молочной железы, устойчивым к тамоксифену. Выделена суммарная РНК и провели амплификацию полного домена связывания гормона (РЭalpha) методом ОТ-ПЦР, используя 4 пары перекрывающихся праймеров. По результатам анализа продуктов ПЦР на одноцепочечный конформационный полиморфизм мутаций выявлено не было, однако при секвенировании ДНК были обнаружены два варианта молчащего полиморфизма в кодонах 538 [GA C under -> GA T under (Asp)] и 594 [AC A under -> AC G under (Thr)]. Первый вариант был обнаружен с низкой частотой в опухолях, а второй - с одинаковой частотой как в опухолях, так и в контроле. При секвенировании во всех опухолевых образцах был выявлен также вариант с делецией экзона 7. Показано, что мутации в анализируемом домене не являются существенным механизмом развития резистентности к антиэстрогенам. Рассмотренный метод может быть использован для быстрого и надежного проведения мутационного анализа функционально значимых доменов различных белков.

Представлен исторический обзор классификаций опухолей лимфоидной ткани, начиная с первых работ Т. Ходжкина, Р. Вирхова и до современных схем, разработанных Г. Раппопортом и К. Леннертом. Детально проанализированы принципы новой классификации ВОЗ, разработанной международной группой патологов, критерии выделения отдельных нозологических форм с учетом характера роста (нодулярный или диффузный) и природы опухолевых клеток, определяемой на основе анализа цитоморфологических, иммунофенотипических и молекулярно-генетических признаков.

Представлены результаты 15 многоцентровых рандомизированных исследований по оценке эффективности адъювантной химиотерапии посредством интрапортальных инфузий после радикальных операций при колоректальном раке. Практически во всех исследованиях было достигнуто улучшение показателя общей 5-летней выживаемости, однако не выявлено статистически достоверного эффекта снижения возникновения метастазов в печени. Большинство авторов считают, что влияние адъювантной интрапортальной химиотерапии на повышение показателей общей и безрецидивной выживаемости может быть обусловлено уменьшением рецидивов и метастазов рака и является результатом системного действия флуороурацила, вводимого интрапортально.

В печени мышей, различающихся по чувствительности к гепатоканцерогенному действию ортоаминоазотолуола (ОАТ), изучали активность и индуцибельность 7-этокси- и 7-метокси-резоруфин-О-деалкилаз (ЭРОД и МРОД ), специфических маркеров изоферментов цитохрома Р450 1А1 (СУР 1А1) и 1A2 (СУР 1А2), осуществляющих первичное окисление аминоазокрасителей и других канцерогенов, а также активность основных ферментов второй фазы метаболизма ксенобиотиков: ацетил-, сульфо-, УДФ-глюкуронозил- и глутатион-S- трансфераз. Показано, что в дозах, применяющихся для индукции опухолей, ОАТ увеличивает активность СУР 1А1 и СУР IA. Не установлено связи между чувствительностью мышей к гепатоканцерогенному действию ОАТ и индуцибельностью цитохрома Р450 или активностью какого-либо из изученных ферментов. Обнаружено, однако, что в печени мышей чувствительных к канцерогену линий отношение активности ЭРОД:МРОД в 1,3-1,8 раз больше, а суммарная конъюгирующая способность в 1,7-2,7 раза меньше, чем у мышей резистентных линий. Сделан вывод, что если чувствительность или резистентность мышей к индукции опухолей печени и зависит от метаболизма ОАТ, то определяется она балансом активностей ферментов, участвующих в продуцировании и детоксикации его реактивного метаболита.